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| 黄芩素在小鼠体内的药动学及其组织分布研究 |
黄芩素(baicalein，1)是中药黄芩的主要活性
成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎、清除自由基及抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用 I2 。文献报道的
1体内研究多集中在血浆动力学及血浆中代谢产物
的测定，主要有HPLC 、LC—MS／MS 和LC—MS
法(邢杰．黄芩苷在动物体内的吸收和代谢研究．
沈阳药科大学博士学位论文，2005)。组织中1浓
度的测定及组织分布特征研究尚未见报道。本试验
采用HPLC法，以1原形为测定指标，考察了小鼠
尾静脉注射1的药动学及各组织中的分布特征，分
析1在血浆和组织中的分布及消除特征，为有效剂量的合理设计和新制剂的研发提供参考。
l 仪器与试药
1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；高速剪
切机(德国FLUKO公司)；18790型氮吹仪(美国Pierce
公司)。
黄芩素， 含量
98％，批号DFY080212)；1对照品(中国药品生物制品检
定所，含量98％，批号111595．200604)；6 羟基黄酮(2，
内标，Aldrich公司，含量98％，批号02916LC)；维生素
C(北京化学试剂公司)；甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂
均为分析纯。
雄性昆明种小鼠，体重(20士2)g[中国药品生物制品检
定所实验动物中心，许可证号SCXK(京)2005 0004]。
2 方法与结果
2．1溶液配制
黄芩素对照品贮备液：精密称取1对照品25 mg，
置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，得浓度为
500~tg／ml的1对照品贮备液，使用时用甲醇稀释
至所需浓度。
内标贮备液：精密称取2对照品10 mg，置
l00 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成浓度为
100~g／ml的内标贮备液，使用时用甲醇稀释至所
需浓度。
供试品溶液：精密称取1 1 50 mg，置1 00 ml
量瓶中，加50％ (v／v)PEG 400溶液溶解并定容，
制成浓度为1．5 mg／ml的供试品溶液。
2．2 色谱条件
色谱柱C】8柱(4．6 mmx250mm，5 lam)；流
动相乙腈一0．05％磷酸，梯度洗脱(表1)；流速
l ml／min；检测波长320 nm；柱温25℃；进样量
20 ul。以血浆为例，典型色谱图见图l。黄芩素和2的
保留时间分别为16．6和18．8 min，内源性物质不干
扰测定。
2．3 样品处理
血浆样品：精密量取血浆1O0¨l置离心管中，
加入200 mg／ml维生素C溶液5 l、10 1ag／ml内标
溶液50 lal、甲醇300 ul，涡旋60 S，离心(3 600~g)
10 min，取上清液，5O℃氮气流下吹干。加甲醇
100 ul溶解，涡旋30 S后，离心(3 600xg)5 min，
取上清液进样测定。
组织样品：精密称量各组织，加入两倍量的
生理盐水(含0．5％维生素C)匀浆，精密量取匀
浆液100“l，加入200 mg／ml维生素C溶液5 l、
10~tg／ml内标溶液50 1、甲醇800 1，涡旋60 S，
离心(3 600xg)10 min，吸取上清液，50℃氮气流
下吹干。同“血浆样品”的处理方法，加甲醇溶解
后涡旋、离心，取上清液进样测定。
2．4 线性试验及检测限
分别精密量取血浆、各空白组织匀浆液1 O0 ul，
按“2．3”项下方法处理，加入对照品贮备液和内
标贮备液，使血浆和各组织中的黄芩素浓度为0．05、
0．1、0．2、0．5、1、2、5、10、50~tg／ml，2浓度为
5~tg／ml，分别进样测定，记录峰面积。以1、2峰
面积比 为纵坐标，1浓度c为横坐标，进行线
性回归，回归方程见表l。血浆和各组织中1均在
0．05～ 50~g／ml浓度范围内线性关系良好，检测限
均为0．02／．tg／ml。
2．5 精密度和回收率试验
分别精密量取血浆和各空白组织匀浆液100 u1，
按“2．3”项下方法操作，制成含2 5~tg／ml，1浓度
为0．1、1和10~tg／ml(脑组织中黄芩素浓度为0．1、1和
5~g／m1)的样品，各5份，分别进样测定，连续测
定3 d，血浆、心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌和脑组织中1峰面积的日内(n=5)、日间尺 (n=3)均
小于15％。提取回收率为74．2％～ 104．2％ (n=5)，
方法回收率为88．9％～ 113．5％。
2．6 小鼠药动学及组织分布考察
取雄性小鼠30只，尾静脉推注1供试品溶液
(剂量1 8 mg／kg)，分别于给药后1、5、10、15、
30、60 min断头处死，采集血样，离心(400xg)分
离血浆；1、5、15、3O、60 min采血后立刻取出心、
肝、脾、肺、肾、脑、骨骼肌7个组织，用生理盐
水冲洗，滤纸吸干水分，置一20℃冰箱保存。每个
采样点取5只小鼠。
取血浆和各组织，按“2．3”项下方法依法处
理后进样测定，根据随行标准曲线计算不同时间的
药物浓度。给药后，黄芩素在小鼠体内的平均血药浓度
用DAS2．0软件拟合，结果符合二室模型，药．时
曲线见图2，主要药动学参数见表3。1静脉给药
后快速分配到各脏器组织中，不同时间点1在各组
织中的含量分布见图3。
结果表明，1静脉给药后快速分配到各脏器组
织中，分布范围广，其中以肝、肺水平最高，脑中
较低，分布浓度依次为肝>肺>心≈肾>骨骼肌>
脾>脑。
3 讨论
有研究 表明，黄芩素受热或在pH>6．8时不稳定。
本研究采用含维生素C的生理盐水作为匀浆介质，
可确保处理过程中的药物稳定性。
文献 报道，1注射给药后在血浆中被迅速
代谢，消除速率快，代谢物为葡萄糖醛酸酯和硫酸
酯，其中主要代谢产物为黄芩素一7．D一葡萄糖醛酸
苷(即黄芩苷)。本试验结果显示，给药30 min后
即检测不到1原形，血浆样品中能检测到较高浓度
的黄芩苷(图1)，与文献报道一致。
给药l min时，各组织中的药物分布水平远低
于血药浓度。给药3 min后，伴随着血浆中药物的
快速消除，肝、肺、肾等组织中检测到的药物浓度
逐渐高于血浆水平，且组织中1浓度的维持时间较长、消除较缓。与血浆样品的HPLC图谱比较，组
织样品中未发现代谢产物黄芩苷，提示1在组织中
的代谢机制不同于血浆。关于黄芩素在血浆和组织中的
代谢规律研究及代谢产物结构鉴定，将另文发表。
1的药理活性主要体现在急、慢性炎症和病毒
感染的治疗，如上呼吸道感染、急性扁桃体炎、传
染性肝炎、慢性阻塞性肺炎、肾盂肾炎等 。1静
脉给药后在肝、肺和肾脏等器官中较高的分布水平
及相对缓慢的消除特征，有利于其药理活性的发挥
和感染性疾病的临床治疗。
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