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| RP-HPLC法测定清热神芎丸中黄芩苷的含量 |
清热神芎丸收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第
四册，由大黄、黄芩、川芎等七味药物组成_】]，具有通便泻火，
消肿止痛作用。用于治疗牙痛，便秘，目赤鼻肿等。现行标
准中仅收载了丸剂常规检查，无含量测定项。不能对制剂内
在质量进行有效控制，为控制生产投料，确保产品质量，本文
对现行质量标准进行了完善，建立了RP— HPLC法测定制
剂中黄芩苷含量的方法，以有效控制生产投料。
1 仪器与试药
Waters2695高效液相色谱仪，2487紫外检测器，色谱
工作站(Waters公司)。水为重蒸馏水；所用试剂均为分析
纯。清热神芎丸(市售品，批号：090312、090305、090204、
090725、090321、090823、090322)；黄芩苷对照品。购自中国
药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2．1色谱条件：Kromasil C18(250mm)<4．6ram，5p_m)柱}甲醇
一0．2 磷酸溶液(45：55)为流动相；检测波长280nm；柱温
27℃理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
2．2色谱分离条件及提取方法的选择 参考有关文献∞ ，
采用甲醇一水一磷酸(47：53：0．2)、甲醇一0．4 磷酸溶液
(60：40)、乙腈与0．2 磷酸溶液为流动相进行分析，结果甲醇一0．2％ 磷酸溶液(45：55)为流动相，效果较好。
提取方法的考察：分别以不同浓度乙醇溶液(50 ，
60 ，65 ，7O ，75 ，8O )为溶剂，进行提取，结果以
7O 乙醇溶液提取较为完全。
提取时间的考察：取同批供试品6份，每份约0．10g，精
密称定，分别提取于不同时间(30，60，90，120，150，180min)，
结果表明90min内即可提取完全。
通过对色谱分离条件及提取方法的考察，确定供试品溶
液制备方法为：供试品研细，取约0．1g，精密称定，置圆底烧
瓶中，精密加7O 乙醇50mL，称定重量，加热回流90min，放
冷，再称定重量，用7O 乙醇补充丢失的溶剂量，摇匀，放置
片刻，取上清液，用微孔滤膜(0．45 m)滤过，取续滤液，作为
供试品溶液。
2．3线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品10．53mg，置
50mL量瓶中，加甲醇溶鳃并稀释到刻度，摇匀。作为对照
品贮备液。分别吸取2，4，6，8，10t,I 进样测定。以进样量X
( g)为横坐标，峰面积y为纵坐标。进行线性回归，黄芩苷
回归方程分别为：Y 一一70049．23+ 3450752．78 X ，r
0．99995。结果表明黄芩仟住0．4212～2．1060／／g范围内呈良
好线性关系。
2．4干扰试验按供试品处方比例制备不含黄芩药材的阴
性供试品，依照样品含量测定项下方法制成阴性对照溶液。
供试品溶液按照2．2项下供试品溶液制备方法制备。取阴
性对照溶液、供试品溶液、对照品溶液(O．1053mg·I )各
lO“L，按2．1项下色谱条件进行测定，结果阴性供试品对供
试品测定无干扰，见附图l。
2．5精密度试验精密吸取对照品溶液(O．1053mg·L )，
连续进样5次，每次lOp．L，峰面积分别为3119631，3103710，
3089572，3152704，3163735，RSD 为1．0 。
2．6重复性试验取同一批号供试品(090322)5份，按供试品测
定方法测定，结果供试品中黄芩苷含量( )分别为1．93、1．98、
1．98、1．93、1．97，平均值为1．96，RSD为1．32 。
2．7供试品测定 供试品溶液制备方法同2．2项下。取对
照品溶液0．1053mg·L_。，作为对照品溶液。分别吸取对
照品溶液(O．1053mg·L )、供试品溶液各lO L，按2．1项
下色谱条件进行测定，结果见表2。
2．8加样回收试验 称取已知含量的同一批供试品约
60mg，精密称定，置圆底烧瓶中，再分别精密加入对照品贮
备溶液(每1mL含黄芩苷0．2106mg)5mL，按供试品含量测
定方法测定，计算回收率，结果见表3。
2．9稳定性试验对同一供试品溶液在不同时间进行测定，
8h内测定6次，黄芩苷的峰面积分别为3207213、3213742、
3206139、320995l、3210697，3207054，平均值为3207054，
RSD 为0．09 。可知供试品溶液在8h内稳定。
3 讨论
按照《中国药典~2005年版(一部)经试验表明：磷酸溶
液的pH 值对色谱保留时间有较大影响，用磷酸调节溶液
pH值应准确。选用70％ 乙醇溶液作为溶剂提取较为完全。
加热回流时间在90min时已经能够将黄芩苷完全提取。
本文所采用的方法准确、重现性好，可作为控制产品质
量的方法。
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