1 材料与方法

 1．1 动物sPF雄性sD大鼠，体质量230～3o0 g，由广东 省医学实验动物中心提供，合格证号：2o06A015。饲养于广 州中医药大学实验动物中心SPF级动物房。

 1．2 药物及仪器设备

 1．2．1 药物黄芩苷(纯度>98％)，准确称取500 mg黄芩苷溶于20 lTlL生 理盐水，摇匀，即配成25 mg／lTlL黄芩苷水溶液，于每天注射 前配制。链脲佐菌素(sTz)，美国SIG姒公司产品，称取1 g 的sTz，溶于5O mL柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液(0．1Ⅲ0l／L) 中，摇匀，即为2％的sTz，于造模前1天配制，一4℃冰箱保 存，用于造模剂。AngII试剂盒，北京科美东雅生物技术有限 公司，批号：2o061225。

 l_2．2 仪器美国0NE T0ucH血糖仪及血糖试纸： 日立 71o0全自动生化仪；SN695B型放免y测量仪。

 1．3 动物模型的复制取sD大鼠25只，随机分为3组，分别为(正常)对照组(5只)、模型组(10只)、黄芩苷组(10 只)。模型组和黄芩苷组禁食10小时后，按2％链脲佐菌素 (sTz)55 mg／kg单次腹腔注射，以制备糖尿病肾病(DN)动物 模型。l周后，造模大鼠在不禁食状况下测定血糖，即非空 腹血糖≥16 mol／L，且尿糖强阳性者诊断为糖尿病， 造 模成功。随后继续给予自由饮食饲养，至第7周，连续2次 抽测DM大鼠尿蛋白，如果明显高于对照组，即为DN造模成 功。试验过程中，将DM和DN造模不成功的动物淘汰。造模 成功，各组大鼠开始控制食量25 g／(只·d)，自由饮水。同时 腹腔注射黄芩苷水溶液40 mg／(kg·d)治疗6周，模型组大 鼠腹腔注射生理盐水l mIJ／(只·d)。

 1．4 标本收集治疗6周后，收集24小时尿液以检测尿 肌酐、尿微量蛋白，尾静脉穿刺测血糖，然后所有大鼠称重， 眼眶取血约5 mIJ，收集于盛有125乩酶抑制剂(8一羟基喹 啉5O ，二巯基丙醇25 ，EDTA—Na25O )的试管中， 1 200 r／min，离心l0分钟，分离血浆，一4℃保存待测。同时， 取0．5g肾皮质，加入5 r『lL生理盐水，一4℃冰水浴匀浆， 4 000 r／min速度冷冻离心2O分钟，取上清液(母液)一20℃ 保存备用。检测时取O．5mL母液加入蒸馏水4．5 TIL，配制成 1％肾组织匀浆液用于检测。以上样品采用放射免疫分析法 (RIA)一次完成实验，并严格遵照试剂盒说明书要求操作。 1．5 统计学方法采用sPss11．o软件，数据以 d”表 示，组间进行方差分析，并进行两两比较。

 2 结果

 2．1 一般状态观察观察发现，对照组大鼠在实验过程中 精神良好，动作灵活，毛色有光泽，进食正常，体质量逐渐增 加。DN造模组大鼠明显表现多饮、多食、多尿、消瘦，其毛色 干枯，光泽较差，精神倦怠，体质量减轻。而黄芩苷组大鼠的精神状态明显好于模型组，双目有神，活动量增大，毛发柔 软有光泽，三多症状有所改善。

 2．2 各组动物体质量的变化见表1。

 从上表数据显示，造模后，在没有采用黄芩苷治疗前， 模型组和黄芩苷组大鼠之间体质量没有显著差异，但与对 照组比较，差异均有显著性意义

 2．3 各组动物。肾脏指数、血糖、尿肌酐、尿微量蛋白含量的 变化见表2。

 上表显示，模型组与对照组比较，肾指数、血糖和尿蛋 白含量明显升高CP

 2．4 各组动物大鼠血浆、肾脏组织AngII含量的变化表 3结果显示，模型组血Ang II含量明显高于正常组，差别有 显著性意义(P

 3 讨论

 肾脏指数、血糖、尿肌酐和尿微量蛋白含量是反映。肾脏 及功能状况的指标，所以，本研究内容可以较好的反映黄芩苷对DN大鼠的治疗作用。在DN早期，高血糖引起AR表达 增强，从而激活糖代谢多元醇，促进非酶糖基化，使血糖升 高，这是本实验使用的经典sTZ致DM的造模方法的机制， 延长观察时间，模型动物便可从DM逐渐发展到DN。模型组 大鼠的血糖升高、体质量减轻，是糖尿病的消耗状态。DN造 模后大鼠肾功能损害，尿蛋白量明显升高，继而尿肌酐浓度 均值有明显下降，说明肾脏肾小球滤过率(GFR)已由升高开 始转为下降，这些结果均提示，DN模型制作成功⋯ 。笔者在 既往实验研究中多次观察到黄芩苷组治疗后大鼠血糖降 低，提示黄芩苷的降糖作用不是偶然现象，因而推测黄芩苷 对DN的治疗作用可能与血糖控制有 ]；内生肌酐清除率 (ccr)是反映GFR的常用指标，与尿肌酐成正比。由于DN大 鼠肾小球的高灌注，引起GFR开始增高，随后逐渐下降，导 致代谢产物在体内堆积，使机体整体状况的下降或恶化。 0ta等[s 实验观察到DN患者肾小球基底膜(GBM)超微结构 发现有特殊的腔管结构，其孔径大于白蛋白分子，表明GBM 孔径出现选择性的破坏，导致DN逐渐发展到出现蛋白尿。黄芩苷减轻蛋白尿的机制可能与其降低血糖和改善GBM结 构有关。实际上，临床实验观察到黄芩苷确实可以改善DN 病人GFR[ 。

 在DN的发展过程中，RAS也是一个不可忽略的重要环 节，在RAS的组成中，AngIr是最有活性的因子。大部分学者 认为在DM早期某些肾脏部位的RAs成分至少有中等程度 的激活，局部升高的AngII会进一步增强TGF 的表达，于 是形成了一个相互上调的恶性循环，加速了DN的进程⋯ 。 本实验结果也证明了DN造模后，大鼠血Ang1I含量明显高 于正常组，在黄芩苷治疗后，血AngII明显恢复，这也许是57 黄芩苷对DN大鼠肾功能保护的靶点，即黄芩苷通过降低高 血糖状态下RAs的活性，治疗或保护DN大鼠的。肾脏功能。 除此之外，黄芩苷降低Ang II后还可以通过降低系统血压 和肾小球内压，改善血液内环境及循环功能等恢复肾功 能[ 。

 然而，模型大鼠肾组织中AngII含量仅有轻度下降，可 能是因DN早期肾脏的I认s仅仅是局部激活，而取肾皮质匀 浆检测肾组织AngII含量的方法使局部激活的AngII可能 被稀释，故检测结果出现降低 】。也有文献报道大鼠肾组 织AngII含量与正常对照组无差 _l卜 ]，这可能与DM是血 管及近端肾小管的Ang II生成增加引起血管病变有关，并 非全肾AngII均起作用。

 综上所述，黄芩苷对高血糖所致的DN大鼠肾功能的保 护或治疗作用，与其降血糖和抑制RAs的活化等环节改善 肾脏GBM结构有关，至于黄芩苷降低DN大鼠血糖的机理有 待进一步研究。