| 当前位置 : 首 页 >> 大黄酚 >> 正文阅读 |
 |
| 高效液相色谱法测定溃平宁颗粒中大黄素和大黄酚含量 |
溃平宁颗粒是由大黄浸膏、白及和延胡索粗碱3味中药
组成的复方制剂。具有抑制胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性，减
弱胃酸酸度，从而有效地抑制粘膜损害因子的作用；隔离胃及
十二指肠内消化液与粘膜溃疡面的接触，促进溃疡面的愈合；
抑制幽门螺旋杆菌生长。用于胃溃疡、急、慢性胃炎，十二指
肠溃疡及合并上消化道出血症。原制剂质量标准只有化学鉴
别。为提供该药可行的质量标准，笔者选择方中君药大黄浸
膏的有效成分大黄素和大黄酚为含量测定对象，采用高效液
相色谱法。对大黄素和大黄酚进行含量测定。中药复方制剂中大黄素和大黄酚的含量测定方法已有报道[1～4】。但笔者尚
未见对该药中大黄素和大黄酚进行含量测定的报道。笔者在
本实验中所建立的方法回收率高、分离度好、方法简便，适于
该药的质量控制。
1 仪器与试药
1．1 仪器 AgilentllO0高效液相色谱仪，VWD紫外检测
器；Chemstation色谱工作站。
1．2 试药大黄素和大黄酚对照品(中国药品生物制品检定
所，批号：110756—200110；110796．200615)；溃平宁颗粒吉林省
长源药业有限公司(批号：20070501，20080307，20090105)；甲
醇为色谱纯，水为纯化水。其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 色谱条件 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂AgilentZorbax SB-CI8色谱柱(4．6ram×250mm，5gm)；流动相：甲醇一
0．1％磷酸溶液(80：20)；流速：1．OmL·min-1；柱温：3O℃ ；检
测波长：254 am。
2．2 溶液的制备
2．2．1 对照品溶液的制备：精密称取大黄素和大黄酚对照品
10．28mg。13．08mg，分别置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解，
并稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述两种溶液各1．0mL置
20mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得大黄素
0．005140mg·mL_。、大黄酚0．006540mg·mLI1的对照品溶
液。
2．2．2 供试品溶液的制备：取溃平宁颗粒5袋内容物，研细，
取约1．Og，精密称量，置于平底烧瓶中，精密加入乙醇25mL，
加热回流30min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，
过滤。精密吸取续滤液5．0mL置平底烧瓶中，挥去乙醇，加
10％盐酸lOmL加热回流lh，冷却，移至分液漏斗中，用乙醚
分次萃取，每次20mL，乙醚液回收溶剂，残渣用甲醇溶解并
定容至25mL容量瓶中，摇匀，高速离心，取上清液，即得。
2．2．3 阴性供试品溶液的制备：根据溃平宁颗粒处方，取不
含大黄浸膏的处方量药材，按制备工艺制备缺大黄浸膏的阴
性样品。按“2．2．2”项方法制成缺大黄浸膏的阴性溶液。在
“2．1”项色谱条件下对供试品溶液、对照品溶液及阴性溶液检
测．记录高效液相色谱图。
2．3 系统适应性试验分别取对照品溶液、供试品溶液和阴
性供试品溶液各1O ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
理论板数以大黄索和大黄酚峰计大于3000；供试品色谱中大
黄素和大黄酚峰与相邻峰为基线分离；阴性供试品溶液色谱中在
大黄素和大黄酚保留时间处无吸收峰，说明无干扰(见图1)。
2．4 线性关系考察精密
称取大黄素和大黄酚对照品
10．28mg、13．08mg。分别置于
100mL容量瓶中，加甲醇溶解
并稀释至刻度，摇匀，分别精
密吸取2．0mL置同一20mL
容量瓶中。加甲醇稀释至刻
度。摇匀，作为对照品溶液。
分别精密吸取上述对照品溶
液2，4，8，12，16，2O L。按
“2．1”色谱条件，进样，测定大
黄素和大黄酚峰面积。以进样量(x)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，绘制标准曲
线．得回归方程：大黄素Y=3587．1X一1．5986(r=0．9999)；大
黄酚Y=5006．8X-2．8746(r=0．9999)。结果表明，大黄素在
进样量为0．02056-0．2056~g、大黄酚为0．02616～0．2616~g
范围内呈良好的线性关系。
2．5 稳定性试验 精密吸取“2．2．1”对照品溶液lOgL，按
“2．1”色谱条件，分别手0，1，2，4，6，8 h各进样测定1次，结
果大黄素和大黄酚RSD分别为1．2％和0．8％(n=6)。表明
该溶液稳定性良好。
2．6 精密度试验精密吸取“2．2．1”对照品溶液10 L，按上
述色谱条件。重复进样6次，其峰面积积分值基本一致，大黄
素和大黄酚RSD分别0．7％和0．3％，说明本方法精密度良
好。
2．7 重现性试验取同一批号样品(批号：20070501)，平行
处理6份。同“2．2．2供试品溶液的制备”的处理方法，测定其
峰面积积分值。结果大黄素和大黄酚RSD分别1．3％和
1．7％ 。
2．8 回收率试验取批号为20070501的样品(大黄素和大黄
酚含量为O．2455mg·g-1 0．2252mg·g-1)，研细，精密称取9
份，分别加入8O％ 、100％、120％大黄索和大黄酚对照品，精
密加入乙醇25mL，按“2．2．2”制备方法操作，精密吸取供试
品溶液10止，按“2．1”色谱条件，测定，计算回收率。结果大
黄素和大黄酚的平均回收率分别为99．9％、99．5％，RSD分
别为1．2％ 、1．7％(n=6)。结果(见表1、2)，表明本方法回收
率好，方法可行。
2．9 样品的含量测定 按“2．2．2”处理样品，分别精密吸取
对照品溶液与供试品溶液各10t~L，进样，测定3批次样品中
大黄素和大黄酚的含量。结果批号为20070501，20080307，
20090105的3批样品。大黄素含量分别为0．2455，0．2578．
0．2814mg·g～，大黄酚0．2252，0．2466，0．2698mg·g～。
3 讨论
选择供试品溶液的制备方法时，笔者查阅相关文献，一般
采用甲醇提取，因考虑到甲醇与乙醇的极性相似，且大黄素和
大黄酚都可溶解，因此对两种溶剂进行考察，结果发现，乙醇
的效果比甲醇好，而且乙醇毒性更小．因此采用乙醇作为提取
溶剂。在选择萃取溶剂时，药典及相关文献采用氯仿萃取，笔
者选择极性相似的乙醚作为比较，发现乙醚萃取的效果与氯
仿相近，考虑减小实验的毒性，采用乙醚作为萃取溶剂。同时
在2．5mol·LI1硫酸溶液作为水解溶剂时，发现回收乙醚时。
温度过高，或者处理不当，容易引起残渣的碳化，从而减小测定结果。必须采用水洗萃取液，从而增加操作步骤，笔者采用
1O％盐酸水解，结果与2．5tool·L-1硫酸水解效果一致。选择
测定波长时。结合文献资料，确定测定波长为254nm。流动相
选择，本实验参考药典大黄浸膏含量测定方法．采用甲醇和
0．1％磷酸溶液能达到基线分离，且峰形对称，理论塔板数较
高，故采用甲醇与磷酸溶液配比作为流动相。
|
|
|
|
