本品处方药味较多，为保证制剂质量，本文用 高效液相色谱法对复明胶囊中所含的决明子活性 成分大黄酚进行含量测定，以期找到稳定可靠含量 测定方法。

 1 仪器与试液

 高效液相色谱仪：岛津LC一10AD型高效液相 色谱仪，SPD一10AVP型紫外检测器，LC一10Atvp 型泵，C18(5txm，250 mm×4．6 mm)色谱柱。

 大黄酚对照品(批号：110796—200311，含量测 定用，购自中国药品生物制品检定所)。甲醇、乙 腈为HPLC级试剂(美国TEDIA公司)；水为超纯 水；其余试剂为分析纯(西安化学试剂厂)。

 复明胶囊由陕西康惠制药有限公司提供。

 2 实验方法

 2．1 色谱条件用反相高效液相色法测定大黄酚 含量的方法较为成熟，本标准参考有关文献，经试 验后确定如下方法：

 色谱柱：c18柱(5 m，250 nlnl×4．6 lnln ID)；流动相：乙腈一水一冰醋酸(70：30：1)为流动相；检测 波长为429 nm；柱温为室温；流速为1 mL／min；进样 量：20 IxL。

 2．2 测定波长的选择精密称定大黄酚对照品适 量，加无水乙醇一乙酸乙酯(2：1)制成每1 mL含 12．5 g的溶液，以紫外分光光度法进行扫描，测 试波长范围为350～500 nm，实际的测定结果： 430 am波长处为最大吸收波长，参考中国药典及有 关文献，故将测定波长定为429 nm。

 2．3 供试品溶液的制备取本品内容物适量，研 细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50 mL，称定重量，置水浴加热回流提取 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，加 10％盐酸30 mL，置水浴中加热水解1 h，立即冷 却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30 mL，合并三 氯甲烷，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇一乙酸乙 酯(2：1)溶解，并转移至10 mL量瓶中，并稀释至 刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过(0．45 m)取续滤液， 即得。

 2．4 对照品溶液的制备及线性条件考察

 2．4．1 对照品溶液的制备精密称定大黄酚对照 品适量，加无水乙醇一乙酸乙酯(2：1)制成每1 mL 含12．5 g的溶液，即得。

 2．4．2 线性关系考察 取大黄酚对照品溶液 (12．2~g／mL)适量，分别精密吸取上述对照溶液 5．0 L、7．．5 L、10 p,L、12．5 L、15．0 L、20 p,L ，注 入液相色谱仪，按上述色谱仪条件检查，记录色谱图，测定峰面积，结果见表1。并以峰面积对进样量进行回归，得标准曲线方程。

 2．5 阴性干扰试验按复明胶囊生产工艺制法制备不含决明子的样品，此样品按上述供试品溶液制法制备阴性对照品溶液，照样品测定法，精密吸取10 L注入液相色谱仪，结果在与对照品色谱峰相同的保留时间处无色谱峰出现，表明阴性对照无大黄酚的吸收峰，无干扰现象。

 2．6 精密度试验精密吸取供试品溶液(批号070801)，按拟定的色谱条件测定，重复进样5次，大黄酚峰面积的RSD=0．98％。结果证明，精密度良好。

 2．7 稳定性试验取供试液(批号070801)分别在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

 2．8 重复性试验按拟定的含量测定方法，对同一批样品(批号070801)分别制备5份供试品溶液，测定大黄酚的含量。结果表明，用此方法测定制剂中大黄酚含量重复性良好。

 2．9 回收率试验取浓度为0．0122 mg／mL的大黄酚对照溶液5 mL、5 mL、5 mL、10 mL、10 mL、10 mL，分别置具塞锥形角瓶中，挥干溶剂，再分别加入已知大黄酚含量的制剂(批号070801)，按上述样品制备方法和色谱条件制备加样回收供试品溶液，并注入高效液相色谱仪，以下列公式计算回收率，结果见表2。

 2．1O 制剂中大黄酚的含量测定见表3。

 3 讨论

 3．1 实验研究采用甲醇为溶剂，加热回流提取 30 rain，取续滤液一定量蒸干，加10％盐酸置水浴 中加热水解1 h，再用三氯甲烷振摇提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷，回收溶剂至于，残渣加无水 乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶解等处理样品，能够有效 提取大黄酚，其精密度、稳定性、重复性、加样回收 率等试验结果均良好，空白干扰试验无干扰，表明 该品种质量标准较为完备，可控性强，含量专属性 强、灵敏度高。

 3．2 根据大黄酚无水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶液 的紫外吸收特征，最大吸收波长430 nm，参考中国 药典，选定429 am为测定波长，能够达到基线分离， 并且分离度较好。