关键词:银杏内酯A 银杏内酯B 药代动力学 GC－MS法

 银杏内醋是二萜类和倍半萜类内醋，二萜类内 醋主要有银杏内酯A，B，C，J，M等，倍半萜类内醋有 白果内醋⋯ 。白20世纪70年代初发现了PAF后， 药理学家对银杏内醋进行了研究，证明银杏萜内醋 是强血小板活化因子拮抗剂 ，对免疫系统 ，中枢 神经系统，缺血损伤有保护作用并有抗休克、抗过敏 及抗炎作用。国内外的药理学家对银杏内醋的 药理作用及临床应用进行了大量的研究。银杏叶制 剂在临床的应用也愈加广泛，有关银杏内鹭的倬外 检测方法很多，但是有关银杏内醵的药代动力学报 道较少。作者仅见国外有一篇文献报道” 。国内李 长龄等 用抑{菌PAF与受体结合的方法，测定了银杏内酯在大白兔体内的药代动力学参数，此方法只 能反映内酯的相对强度，不能得知它们的个别含量。 本研究参照文献[7]，建立了C,C—MS测定血液中银 杏内醋浓度的方法，并对银杏内酯A，B在大白兔体 内的药代动力学进行了研究。

 1 试药与材料

 银杏内酯A，银杏内酯B标准品(Sigma公司)； 银杏内醋A，B混和物(含57．45％A，31．40％B，由首 都医科大学药物研究所提取)；N，O．bls(trimethylsily) acetm~de(批号12778，美国Alltech Ase~ciates，Inc．)。 6只旱大耳白兔，体重(2．66±0．21)kg，由首都医科 大学实验动物中心提供。

 2 仪器

 气相色谱．质谱联用仪(QP一5000，日本岛津公 司)。

 3 方法

 3．1 色谱条件

 色谱柱：30 mx0．25 mm毛细管柱；载气：氮气； 柱流速：lO ml·min一，色谱柱的进样口温度为 250℃ ，接口温度230℃ ，柱温从250℃ 以5℃ ·-,in 的速度升到275℃ ，然后以1℃ ·min 的速度升至 285~C，最后以15％ ·min。。升至300~C，保留5 ；扫 描质量：625．00，581 00，391．00。

 3．2 给药与取血方法

 将大耳白兔称重，于耳缘静脉按5 ml·kg 给 20％ 的乌拉坦溶液麻醉，1％ 肝煮5 IDl·kg～ ，分离颈 总动脉，插人动脉插管，于耳缘静脉按4 mg·kg 给 银杏内醑生理盐水溶液，于给药后2，5，l0，15，30 min及1，1．5．2 h分别自颈总动脉放血5 rnl，置lOIDl 试管中，以3000 r· n 离心5“n，分离血浆，于 一3O℃ 冰箱保存备用。

 3．3 血浆样品的处理

 将冰冻的血浆室温放置融化，以成滴的速度过 SEP-PAK C 。固相萃取柱，用2 IDl水冲洗血浆蛋白． 然后用6 ml丙酮洗涤草取柱，以丙酮洗脱液于氮气 下吹干，加人N，0．二(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA) 200 衍生物，于75℃水浴中加热1 h，取1 进样， 铡得峰面积和保留时间．与标准曲线对照得到血药 浓度。

 3．4 数据处理

 奉实验所得血药浓度数据用中国药理学会绾的 3P97药代动力学软件进行参数模型拟合。

 4 实验结果

 4．1 银杏内酯A．B的分离效果

 银杏内醋A，B标准液加人空白血浆，经血浆样 品处理项下处理后进样，色谱图见图1。

 从上图可以看出，银杳内酯A，B的分离教果良 好，血浆杂质不干扰测定。

 4．2 血浆标准曲线

 于人空白血浆中分别加人适量标准溶液，配成 浓度为0．88，4．4，8．8，17．6，44腭·ml 的银杏内醣 A的标准溶液系列，浓度为0．27，1．38，2．75，5．50， l3．7O ·IDl 的银杏内醣B标准溶液系列。准确吸 取1 IDl标准溶液系列，按照血浆样品处理项下葶 取，取1 进样，以峰面积(y)和内醣浓度( )作回 归，得银杏内醋A的回归直线为r=一1806．$．78+ 30712．32X(r=0．9998)，银杏内醑B的凰归直线为 y： 一5136．15+36440．12 (r；0．9999)，最低检 测浓度lO蜡·IDl～ 。

 4．3 回收率及稳定性实验

 用空白血浆1 I口l，加人适量的银杏内醣标准液， 配成浓度为8．70，5．76，7．71 Pg·rnl 的慑杏内瞳A 溶液和浓度为7．51，3．72，6．52 Pg·ml 的慑杏内醣 B溶液，按血浆样品处理项下处理后，于日内的不同 时间和不同的日间分别进样，结果见表1。

 4．4 银杏内南A，B的血药浓度

 银杏内醑A，B在大白兔体内的血药镳度．时间 曲线图见图2。