| 当前位置 : 首 页 >> 银杏内酯B >> 正文阅读 |
 |
| 银杏内酯B对动脉粥样硬化家兔模型血清CRP和主动脉VCAM-1 mRNA的影响 |
动脉粥样硬化(AS)是一种常见的病理现象，是引起多种心脑血管疾病的病理生理基础。越来越多
的研究发现，动脉粥样硬化斑块中不仅含有脂质，
而且有大量炎症细胞浸润Ⅲ，以血管壁积聚了大量
单核细胞和淋巴细胞为特征。动脉粥样硬化早期，
单核细胞向血管内皮细胞黏附，这一过程主要由血
管细胞黏附分子一1(VCAM一1)介导，而C反应蛋白
(CRP)是炎症反应的非特异性产物，研究表明CRP是预测心血管危险最有力的炎症标记物之一嘲，因
此，本实验建立高脂家兔动脉粥样硬化模型，从血
清CRP表达和主动脉VCAM一1 mRNA表达两个方
面观察银杏内酯B(EGB)对动脉粥样硬化的作用。
1 材料与方法
1．1 动物及饲料 纯系日本大耳白家兔35只，雄
性，体质量1．7—2．0 kg，北京科宇动物养殖中心提
供。饲养于天津中医药大学实验动物中心(环境设
施符合《中华人民共和国卫生部实验动物标准》二
级标准)。单笼饲养，自由饮水。
高脂饲料组成：胆固醇2％(天津市英博生化试
剂有限公司，含量>98％)、新远牌大豆色拉油10％
(秦皇岛金海食品有限公司)、普通饲料88％(天津
市武清区科达养殖中心提供)。
1．2 药品及试剂银杏内酯B(由天津中一药厂提
供，纯度92．56％以上)，Rabbit CRP ELISA试剂盒
(USA)。TaqMan Reverse Transcription Reagents试剂
盒、SYBR Green PCR Master Mix reagent kits试剂盒
(Biosystems o
1．3 仪器酶标仪(SPECTRA)，低温高速离心机，
实时定量PCR仪(ABI7300)。
1．4 实验分组及模型制备35只家兔普通饲料适
应性饲养1周后，随机分为对照组10只，模型组
10只，银杏内酯B组15只。对照组饲以普通饲料
100 g，其余2组每天每只给予50 g高脂饲料加50 g
普通饲料(含胆固醇1％，即1 g)，自由饮水。8周以
后，在保持原喂养方案下，银杏内酯B组每只口服
EGB：5 mg／(kg·d)。1周称质量1次，根据体质量变
化相应加减剂量。从分组饲养至处死，全部实验周
期为16周。造模过程中未知原因死亡3只，剩余样
本量为：对照组9只，模型组10只，银杏内酯B组
l3只。
1．5 酶联免疫吸附(ELISA)法检测家兔血清CRP
含量处死动物前，耳缘静脉取血，离 5,3 000 r／min，
15 min，取血清，按照试剂盒的要求，测定血清CRP
含量。
1．6 实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)测
定VCAM一1 mRNA表达处死动物后，迅速打开腹
腔，截取统一部位主动脉，约50 mg，液氮中保存。
采用Trizol试剂盒提取血管总RNA。采用
TaqMan Reverse Transcription Reagents试剂盒和
oligod(T)16引物将总RNA(0．2 I．Lg)反转录为cDNA
(10 L体系)。0．5 L的cDNA产物用作定量PCR扩增的模板。PCR扩增反应采用SYBR Green PCR
Master Mix reagent kits试剂盒和特异性引物。以看
家基因GAPDH作为内参，VCAM一1为被测基因。引
物序歹U为：GAPDH—F：5 一TGcACCACCAAcTGCTTA
GC一3 ；GAPDH—R：5 一TCTrCTGGGTGGCAGTGAT
G一3 ：VCAM 1一F：5 一GGAAAAAGGAGTFCAGGTG—
GAA一3 ：VCAM 1一R：5 一CCAAAGGGCCACTCAAAT
GA一3 (GenBank Number：AB128156)[31。数据采用
2-zxA盯相对定量法 分析。
1．7 统计学处理采用SPSS 11．5统计软件。结果
用均数±标准差( ±s)表示，组间比较采用单因素方
差分析，以P<0．05为有统计学差异。
2 结果
2．1 银杏内酯B对家兔动脉粥样硬化模型血清
CRP含量的影响模型组较对照组升高，且差异具
有显著性，P银杏内酯B下调血清CRP含量。见表1。
2．2 银杏内酯B对家兔动脉粥样硬化模型VCAM一1
mRNA表达的影响模型组比对照组升高，且差异
有显著性，P<0．0l，高胆固醇上调VCAM一1 mRNA
表达。银杏内酯B组较模型组降低，且差异有显著
性P<0．01，银杏内酯B组下调VCAM一1 mRNA表
达。见表2。
3 讨论
CRP是一种非特异性的炎症反应物，其水平与
炎症的出现及其严重程度密切相关，作为炎症标志
物被认为是心血管事件危险最强有力的预测因子之一I2J。在AS疾病中粥样斑块内的平滑肌细胞和巨
噬细胞可产生大量的CRP，直接参与到AS的各个
阶段促进疾病的发展阁。目前，CRP对预测和评价冠
状动脉疾病的治疗效果及判断预后均有重要临床
价值[61。
因此，本实验从炎症角度人手，拟从上述两个
方面观察银杏内酯B对家兔动脉粥样硬化模型的
影响，推测银杏内酯B的作用和机制。实验结果显
示：银杏内酯B能够有效降低血清中CRP的浓度，
提示其具有通过抑制炎症反应抗动脉粥样硬化的
作用：同时能够明显降低血清VCAM一1的表达，抑
制炎症反应的通路，进而起到抗动脉粥样硬化的
作用。
|
|
|
|
