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| RP-HPLC法测定超临界提取物中淫羊藿苷的含量 |
本实验旨在对淫羊藿CO 超临界流体萃取物
的研究中，建立准确，快速，灵敏的质量控制方法，
以期更有效的开发利用这一天然药物资源。
1 仪器与试药
1．1 仪器
DOINEX高效液相色谱仪(配有PDA一3000光电
二极管矩阵检测器，P一3400A分析泵)，Chromeleon
色谱工作站；HA221—50—06型超临界萃取装置(江
苏南通华安公司)；FA1004N型电子分析天平(上海
精密科学仪器有限有限公司)；KQ一100型超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1．2 试药
淫羊藿苷对照品自中国药品生物制品检定所
购买；淫羊藿叶购自河南聚仁中药饮片有限公司，
批号20091115；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其它试
剂均为分析纯；二氧化碳(99．95％)。
2 方法与结果
2．1 淫羊藿超临界提取物的薄层色谱鉴别
2．1．1 供试品溶液的制备
取淫羊藿药材粉末100 g装于萃取釜，以cO：为
溶剂，设定萃取釜、解析釜的温度分别为60℃、25℃，
压力分别为30 MPa、6 MPa，进行动态萃取2 h，得到
萃取物，制得供试品溶液备用。
2．1．2 淫羊藿苷对照品溶液I的制备
精密称取淫羊藿苷对照品10．0 mg于10 mL量
瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得1．0 mg·mL 的
对照品溶液I。
2．1．3 薄层鉴别
分别吸取上述供试品溶液、对照品溶液I，硅胶
H板上点样，以氯仿一甲醇一甲酸为展开剂，1％三氯
化铝乙醇溶液显色，置紫外灯365 nm下检视，供试
品溶液在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色
的斑点，说明样品中含有淫羊藿苷成分。
2．2 淫羊藿超临界提取物的高效液相色谱检测
2．2．1 色谱条件
本文参照有关文献嘲，制定如下色谱条件，色谱
柱：Hypersil ODS C18柱(250 mm~4．6 mm，5 m)，流动
相：流动相A(甲醇)和B(0．1％冰醋酸溶液)梯度洗脱
0 min，A 30％ ，B 70％ ；10 min，A 55％ ，B 45％ ；15 min，A
67％ ，B 33％ ；20 min，A 68％ ，B 32％ ；22 rain，A 75％ ，
B 25％。流速：1 mL·min ；检测波长：270 lqm；柱温：
25 oC；进样量：20 IxL，色谱图见图1。
2．2．2 色谱系统适用性实验
按淫羊藿苷峰计算，色谱系统的理论塔板数为
48 784；淫羊藿苷与其相邻的色谱峰的分离度大于
1．5，淫羊藿苷与相邻的色谱峰可以完全分离。
2．2．3 淫羊藿苷对照品储备液Ⅱ的制备
精密称取淫羊藿苷对照品10．6mg，置于10 mL
量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为
1．06 mg·mL 的对照品储备液Ⅱ。
2．2．4 线性关系考察
精密吸取对照品储备液Ⅱ0．1，0．2，0．4，0．6，0．8，
1．0 mL置于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。
按色谱条件测定，以峰面积为纵坐标、进样量为横坐
标绘制标准曲线，得到线性回归方程：Y=48．838X+
3．467 8，r=0．999 1。结果：淫羊藿苷在0．212—2．12 Ixg
进样量范围内线性关系良好。
2．2．5 样品稳定性实验
样品溶液室温放置，于8 h内每间隔2 h测定淫
羊藿苷的含量，RSD为0．99％，说明样品溶液在8 h
内基本稳定。
2．2．6 精密度实验
按色谱条件测定，对0．010 6、0．063 6、0．106
mg·mL 3个质量浓度分别进样3针，量取峰面
积，计算RSD。高、中、低3个质量浓度的RSD分
别为1．17％、1．92％、1．59％。由实验结果可知，测定
方法的RSD值不大于1．92％。
2．2．7 重复性实验
取同一批淫羊藿药材，按“2．1．1”项下方法，平行制
备6份供试品溶液，分别测定含量。淫羊藿苷含量测定
结果的RSD为2．22％，表明分析方法重复性良好。
2．2．8 加样回收率实验
精密称取同一批号已知含量的样品6份，分别
按其中淫羊藿苷含量的80％、100％、120％~人淫羊
藿苷对照品，按样品溶液的制备方法操作，分别进
样，计算回收率。平均加样回收率为98．7％，RSD为
1．18％(n=6)。
2．3 淫羊藿超临界萃取物的测定
分别按上述确定的方法制备样品后测定淫羊藿苷的含量，3次测定结果得到淫羊藿苷在药材中
的平均含量为0．092 mg／g。
3 结论
3．1 比较图b和图c可以看出，超临界流体萃取的
选择性较好，萃取物的淫羊藿苷含量较高，杂质成
分相对较少，有利于粗提物的进一步精制。索氏提
取样品的杂质相对较多，而且需要耗费更多的有机
溶剂和提取时间。超临界萃取技术可以应用于淫羊
藿中淫羊藿苷的提取。
3．2 实验先后选择甲醇一0．5％冰醋酸(60：40)、甲
醇一0．1％冰醋酸(60：40)，甲醇一0．1％冰醋酸(梯度洗
脱)体系，从分离情况和出峰时间等综合分析，选择
了甲醇一0．1％冰醋酸梯度洗脱，色谱条件稳定。
3-3 超临界CO：萃取技术在中药提取中具有绿色
环保等诸多优点，本实验针对该技术提取的淫羊藿
超临界CO：萃取物，建立了高效液相色谱分析方
法，具有较高的精密度，适用于检测淫羊藿超临界
提取物中淫羊藿苷的含量，同时也为黄酮类成分的
超临界萃取物质量控制提供参考。
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