|  雷公藤多苷(TWP)具有抗炎、免疫抑制、抗生育 等作用,是一种常用的抗风湿药物。对生殖系统的副 作用限制了雷公藤多苷在风湿病中的应用。如何防 治其生殖系统毒副作用已成为目前医学界的难点。 淫羊藿是传统的补肾药,淫羊藿苷(Ica)是其主要的 有效成分之一,目前研究表明,其可明显促进幼年小 鼠附睾及精囊的发育,对离体培养的大鼠睾丸间质 细胞睾酮的基础分泌和环磷酸腺苷的生成也有促进 作用【”,但对雷公藤多苷所致睾丸病理损伤的影响未 见报道,我们对此进行了初步探讨。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及分组选用8周龄昆明种雄性小 鼠30只,体重(40.9~2.9)g,SPF级,由上海斯莱克实 验动物有限责任公司提供,动物许可证号:scxx(沪) 2007—0005。饲养在上海中医药大学附属龙华医院动 物房内,室温(27_+1)℃,食用全价营养颗粒饲料,饮 用自来水。适应性喂养1周,随机分为3组(正常组、模 型组、治疗组),每组lO只,各组之间体重经方差分 析,差异无统计学意义(P>0.05)。(见表1)
1.1.2 药物及试剂 淫羊藿苷(规格:98%,HPLC),用双蒸水配成 36 mg/mL的混悬液,置4℃保存备用;雷公藤多苷 片,批号:080913。用双 蒸水配成12 mg/mL的混悬液,置4℃保存备用。
1.1_3 仪器设备LEICA—RM2135型切片机,LE— ICA—DME光学显微镜,由上海徕卡显微系统有限公 司制造。
1.2 方法
1.2.1 给药剂量(1)正常组:每天生理盐水05 mUlOOg 体重灌胃,连续30 d,1次/d。(2)模型组:参考文献[2】 进行造模。雷公藤多苷混悬液每天0.25 mlJl00 g体重 灌胃,以及生理盐水每天0.25 mL/100 ght重灌胃,连 续30 d,1次/d。(3)治疗组:雷公藤多苷混悬液每天 0.25 mL/lO0 g体重灌胃,以及淫羊藿苷混悬液每天 0.25 mL/lO0 g体重灌胃,连续30 d,1 7~/d。
1.2.2 观察症状体征实验自开始起,每周称重1次, 观察小鼠的体形、毛色、步态、觅食及活动情况,并记 录动物每天死亡只数。
1.2.3 观察睾丸病理形态第31天用颈椎脱臼法处 死小鼠,取左侧睾丸,用Bouin液(冰醋酸:甲醛:苦味 酸饱和水溶液按1:5:15比例配制,现配现用)固定24 h, 经梯度乙醇脱水,石蜡包埋,制成厚约4 m石蜡切 片,将石蜡切片置于64℃烤箱烘烤2 h以防脱片,再 脱蜡至水洗,苏木精染色8 min,经1%盐酸乙醇分色, 自来水充分冲洗返蓝后,再用0.1%伊红复染5 rain,最 后经梯度乙醇脱水,二甲苯透明,封片。光镜下观察 睾丸组织切片病理形态的改变。
2 结 果
2.1 一般情况死亡l0只,均为灌胃不当当场死 亡。各组体重均增加,经方差分析,P>0.05,各组之间 体重差异无统计学意义(见表2)。除正常组外,其它 各组小鼠于造模后逐渐均出现活动减少,反应迟钝, 畏寒蜷卧,体毛疏松,失去光泽,进食量、饮水量减少 等表现,模型组最严重,治疗组比较轻微。
2.2 光镜观察结果正常组小鼠睾丸,生精上皮 (管壁)厚,细胞层次宽,各级生精细胞排列规则,基 底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞 等各个发育阶段的细胞,细胞增殖旺盛,可见到较多 分裂期细胞,腔内可见成熟精子,问质稀少,血管丰 富,问质细胞发育良好(见图IA);模型组生精小管 大部分退化变性,萎缩,生精上皮(管壁)明显变薄, 细胞层次减少,各级生精细胞排列紊乱甚至缺失,数 量明显减少,生精小管腔内空虚,少见甚至未见成熟 的精子,间质成分增宽,并且出现较大空隙,血管稀 少,间质细胞减少或消失(见图1B);治疗组的镜下 表现与正常组基本相同,生精小管管壁较厚,细胞层 次较宽,各级生精细胞排列较规则,基底面至腔面可 见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶 段的细胞,细胞增殖旺盛,可见到较多分裂期细胞, 腔内可见成熟精子,问质稀少,血管丰富,间质细胞 发育良好(见图IC)。
3 讨 论
雷公藤多苷是从卫矛科植物雷公藤根提取精制 而成的一种极性较大的脂溶性成分混合物,对男性生 殖系统的影响主要表现为精子数量显著减少,活动 力下降,畸形率增加等。本实验模型组小鼠睾丸病理 切片结果说明本实验的造模是成功的。
淫羊藿是传统的补肾药,具有补肾壮阳、强筋 骨、祛风湿作用,广泛用于不孕、不育、性功能障碍以 及风湿病的治疗。淫羊藿苷是淫羊藿主要的有效成 分之一,现代药理研究表明,淫羊藿苷可能具有拮抗 雷公藤多苷的生殖系统毒性的作用。本实验结果显 示,治疗组小鼠肾虚的症状及睾丸病理损伤的程度均 较模型组减轻,说明淫羊藿苷对雷公藤多苷所致小 鼠睾丸病理损伤具有拮抗作用。 |