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| 原花青素对脑缺血再灌注损伤大鼠炎症反应及自由基含量的影响 |
原花青素/">原花青素(原花青素)是一类自然界广泛存在的多酚化合物的总
称，由不同数量的儿茶素和表儿茶素缩合而成，其含大量活性
酚羟基使其具有很强的抗氧化及清除各种活性氧自由基的能
力。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，研究原花青素对大
鼠脑缺血再灌注损伤缺血区中性粒细胞浸润、自由基含量、脑组
织含水量及梗死体积变化的影响，探讨其对脑再灌注损伤保护
作用机制。现报告如下。
1 材料与方法
1．1 材料健康Wistar大鼠60只，雄性，体重(250±30)g，清洁级(广西医科大学动物实验中心提供)，按随机分组原则分为
假手术组(15只)、缺血再灌注组(15只)、原花青素低剂量治疗组(15
只)及原花青素高剂量治疗组(15只)。
1．2 方法 (1)给药途径与药量：原花青素低(50mg／kg)、高剂量
(200mg／kg)治疗组于术前给予灌胃，每24小时1次，连续1
周，于术前1h再灌胃1次。假手术组和缺血再灌注组给予等量
生理盐水灌胃。(2)动物模型的建立：参照文献方法 制备大鼠
局灶性脑缺血再灌注模型。采用颈外动脉插入线栓法，各组均进
行左侧大脑中动脉栓塞。采用石蜡线栓，直径约0．27mm，插入
深度约18mm，此时线栓头位于大脑中动脉起始部。缺血90min
时，抽提线栓实现再灌注。神经功能缺陷评分：按照Longa等
评分标准，各组分别在再灌注24h进行评分。0分为正常，无神
经学征象；1分为动物不能完全伸展右前肢；2分为动物右侧肢体瘫痪，行走时向右侧转圈，出现追尾现象；3分为动物行走向
右侧跌倒，或动物不能站立或动物打滚；4分为无自发活动，有
意识障碍。神经功能缺陷评分在1 3分为模型成功。0分和4
分为模型不成功予剔除，在后续实验中补充剔除出组的动物，保
证每组动物数。(3)髓过氧化物酶(MPO)活性测定：再灌注24h，
各组随机取5只大鼠，深麻后开颅取脑，在冰浴下取左侧大脑半
球缺血组织，以试剂盒(南京建成生物工程研究所)提供的匀浆
介质制成脑组织匀浆。严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算
出MPO活力单位。(4)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)
测定：取上述脑组织匀浆，严格按试剂盒说明书步骤要求操作，
按说明书计算出MDA和SOD含量。(5)脑含水量检测：再灌注
24h，各组随机取5只大鼠，断头取脑后，快速称取左右大脑半球
湿重，置110～115℃烤箱内烤至恒重，再分别称其干重，用(湿
重一千重)／湿重的百分比，作为衡量脑含水量指标。(6)1Tc
染色再灌注24h，将各组另外5只大鼠深麻后开颅取脑。将鼠脑
置于一4℃冰箱20min后，将其切成5等份冠状位切片，置于2％
TFC溶液中，水浴、多聚甲醛液固定。用计算机病理图像分析仪
及梯形法计算出梗死灶体积，各脑片梗死灶体积之和即为梗死
体积。
1．3 统计学处理应用SPSS11．5统计软件。计量资料以( 4-
s)表示，采用方差分析。
2 结果
2．1 各组大鼠MPO活性比较见表1。假手术组MPO活性呈
低水平。缺血再灌注组缺血侧MPO活性较假手术组明显升高
(P<0．05)，原花青素高、低剂量治疗组MPO活性较缺血再灌注组
明显降低(P均<0．05)。高、低剂量组之间差异亦具有显著性
(P<0．05)，呈剂量依赖性。
2．2 各组MDA、SOD含量比较见表1。缺血再灌注组缺血
侧脑组织SOD含量下降，MDA含量升高，与假手术组比较，差
异具有显著性(P<0．05)。原花青素治疗组可提高SOD含量，降低
MDA含量，与缺血再灌注组比较，差异具有显著性(P<
0．05)，高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0．05)，呈剂
量依赖性。
2．3 各组脑组织含水量比较见表1。缺血再灌注组缺血侧
脑组织含水量较假手术组明显升高，差异具有显著性(P <
0．05)。原花青素治疗组降低脑组织含水量，与缺血再灌注组相比
差异有显著性(P<0．05)；高、低剂量组之间差异亦具有显著
性(P <0．05)。
2．4 各组脑梗死体积比较见表1。原花青素高、低剂量组梗死体
积较缺血再灌注组显著减小(P均<0．05)，高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0．05)。
2．5 各组ATP含量比较缺血再灌注组缺血侧ATP含量下
降，与假手术组比较，差异具有显著性(P<0．05)。原花青素治疗组
ATP含量升高，与缺血再灌注组比较，差异具有显著性(P <
0．05)；高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P <0．05)，呈剂
量依赖性。
3 讨论
黄晓瑾等[31发现，原花青素对缺血再灌注脑损伤有保护作用。
本研究结果也证实，脑缺血再灌注损伤给予原花青素治疗，可明显
减少再灌注损伤脑水肿及梗死体积，对缺血脑组织有保护作
用，高剂量原花青素的保护效果更显著。
MPO主要存在于中性粒细胞的噬天青颗粒中。MPO活性
反映中性粒细胞在脑组织中浸润程度。本研究显示，脑缺血再
灌注损伤给予原花青素腹腔注射治疗，可明显减少缺血再灌注后
MPO活性，减少中性粒细胞的浸润，对缺血再灌注损伤炎症反
应有抑制作用。
目前缺血性脑卒中的损伤机制中自由基连锁反应是重要
原因之一。当脑缺血特别是再灌注期，自由基生成和代谢的动
态平衡被打破，氧化应激反应发生，活性氧簇生成增多，攻击
生物膜中的多聚不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化反应，形成脂
质过氧化物(如MDA等)，最终导致膜结构的完整性遭到破
坏，通透性增加，功能丧失，细胞内环境紊乱。同时，自由基诱
导DNA、RNA、蛋白质交联和氧化反应；生物活性大分子和多
糖分子断裂、解聚；线粒体变性，细胞凋亡或坏死。当脑缺血发
生时，脑组织供血不足，能量合成物质供应缺乏，细胞能量代
谢发生障碍，细胞内ATP水平下降，离子泵失效，Na 一K 一
ATP酶活性下降，大量Na 内流，K 外流，细胞去极化，细胞内
游离ca 浓度升高，导致了大量的电子溢出，线粒体电子呼吸
链与氧反应生成自由基，远远超过了机体的清除能力，造成自
由基堆积，形成恶性循环，加重脑损伤。SOD则能够清除超氧
阴离子自由基，保护细胞免受损伤，其活性间接反映了机体清
除自由基的能力。实验中发现，原花青素可显著降低缺血侧脑组织中
MDA的含量，提高脑组织SOD活性，提示原花青素能降低氧化应激
程度，减少体内自由基的形成，增加机体清除自由基的能力，
本实验结果与贾玉洁等 研究结果相一致。
综上所述，原花青素对缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可
能与减少缺血再灌注后炎症反应，减轻氧化性损伤有关，高剂
量原花青素的保护效果更显著。
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