1 材料与方法

 1．1 药品

 原花青素由华中农业大学食品科学系天然产物化学研究室 谢笔钧教授提供，批号：93000717—1。

 1．2 试剂

 D．半乳糖购自上海伯奥生物科技有限公司产品。蛋白 质、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH— P】【)活力和丙二醛(MDA)测试试剂盒均购自南京建成生物 公司(批号20060314)。

 1．3 实验动物

 昆明小鼠60只，SPF级，鼠龄：2月龄，雄性，体重(18± 2)g，由湖北省医学实验动物中心提供，动物生产许可证号： SCXK(鄂)2003-2005。

 1．4 动物分组与给药

 昆明小鼠60只，在本实验室适应性喂养1周后，按体重 随机分为5组，即正常对照组、模型组及原花青素低剂量组(15 mg·rnI )，LSPC中剂量组(30 mg·ml )，LSPC高剂量组 (60 mg·ml )，每组12只。LSPC高、中、低剂量组分别按 每10g体重灌胃给予0．1ml药物，对照组和衰老模型组喂以 等量生理盐水，qd，连续8周。在给药的同时除对照组外，其 余各组颈部皮下注射120rag·kg 的D一半乳糖注射液，qd， 连续注射8周，对照组颈部皮下注射等量的生理盐水。整个 实验期间以全价营养颗粒饲料饲养，饲养于IVC笼具中，每 笼6只，室温18—24℃ ，相对湿度为50％ ～70％ ，每Et 12h光 照，动物自由进食及饮水。每周称量体重一次。末次给药后 2h处死各组动物，迅速取出脑组织，用滤纸吸干，左侧大脑， 用10％ 中性福尔马林固定。其余的脑组织冷冻保存待测。

 1．5 10％ 脑组织匀浆的制备

 末次给药24h后，颈动脉放血处死小鼠，迅速在冰板上 取脑组织，称取2g组织，用预冷的生理盐水，在冰水中用组 织匀浆机制备脑组织匀浆。

 1．6 生化指标的检测

 采用黄嘌呤氧化酶法测定脑组织中SOD活性；采用双 缩脲法测定脑组织中蛋白含量；采用硫代巴比妥酸法检测脑 组织MDA含量；采用化学比色法检测脑组织GSH—Px活力。 以上各指标的检测均按试剂盒说明书操作。

 1．7 小鼠脑组织病理学的观察

 衰老小鼠脑组织结构观察常规石蜡包埋切片(5tzm)，HE染色，在光学显微镜下观察组织切片病理学变化。

 1．8 统计分析

 数据均以 ±s表示，采用SPSS10．0统计软件，进行方差 分析和LSD—t检验。

 2 结果

 2．1 一般情况

 实验期间各组动物均自由饮食，生长状况良好，没有动 物意外损伤和死亡，实验开始时和结束时，各组小鼠体重差 别均无显著性(P>0．05)。

 2．2 病理学变化

 光学显微镜下观察，对照组小鼠脑组织细胞核呈均一淡 蓝色或蓝色，胞浆呈淡红色，胞膜完整连续，海马区细胞排列 整齐，层次紧密，形态完整，细胞边缘清晰，染色质均匀，核仁 深染。衰老模型组：细胞数量较少，细胞间隙增大，排列疏松 不齐；大部分细胞核仁浅染，染色质不均匀；少量神经细胞变 圆、胞核体积减小，固缩，有的甚至消失、核膜皱缩；胞体变 小、胞浆浓缩红染。原花青素低剂量组：大部分细胞形态完整，细 胞边缘清晰，染色质均匀，核仁深染；只有少数神经细胞核仁 浅染，胞浆浓缩红染。LSPC中、高剂量组：细胞排列整齐，层 次紧密，核仁深染(见图1)。

 2．3 原花青素对衰老小鼠脑组织中SOD、GSH—Px活性及MDA 含量的影响

 与对照组相比较，衰老模型组脑组织内SOD和GSH—Px 活性显著下降(P<0．01)，而MDA含量明显升高(P< 0．01)。原花青素高、中、低剂量组均能明显提高脑组织中的 SOD和GSH—Px活性(P<0．O1)，降低其MDA含量(P< 0．01)(见表1)

 3 讨论

 利用D一半乳糖复制衰老的小鼠模型，在一定时问内，连 续给动物注射大剂量D一半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增 高，在醛糖还原酶的催化下还原成半乳糖醇，这种物质不能 被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响正常的渗透压，导 致细胞肿胀和功能障碍。一些重要的酶类包括抗氧化酶的 作用部位及环境改变，导致代谢紊乱，自由基堆积，最终引起 衰老 _4 J。本实验结果显示，与正常成年小鼠相比，衰老小 鼠脑匀浆SOD活性明显降低，MDA含量明显增加。此种变 化与人类衰老时变化相吻合，使用该模型验证药物的作用可 望有较好的临床参考价值。

 自由基理论是衰老的基本理论，大量实验表明衰老尤其 是中枢神经系统的衰老大部分与自由基及其中间产物的毒 性有关 。实际上，衰老过程与自由基的过量生成以及它 们的浓度与抗氧化系统的平衡密切相关 。正常情况下，生 物体内具有一整套的能产生和清除自由基的平衡体系，即自 由基及其中问产物的产生(如MDA、NO等)与抗氧化系统 (如SOD、GSH、GPx、vitamin E，vitamin C等)保持着一定的平 衡，但是，随着衰老过程的进程，这个平衡被打破，以至于活 性氧大量产生，抗氧化系统逐渐减弱。生物体内，氧自由基 作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为MDA，会引起蛋 白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。因 此，MDA既是评价衰老的重要指标，又可反映组织氧化的程 度。SOD和GSH-Px是机体酶防御体系中清除自由基或活性 氧的最主要的抗氧化物酶。它们在人体的抗衰老方面发挥 重要作用。SOD作为体内重要的抗氧化酶，能促使超氧化物 阴离子自由基(O 一)岐化为过氧化氢和氧离子，从而减少脂 质过氧化反应，即减少MDA的生成，使机体细胞和组织免受 损害 J，GSH—Px是机体内存在的一种含硒的清除氧自由基 和抑制自由基反应的酶系统，能特异的催化还原性谷胱甘肽 (GSH)对过氧化氢的还原反应，能抑制烟酸胺腺嘌呤二核苷 酸形成羟自由基(OH一)，对MDA的生成具有明显的抑制作用，所以它们可以保护脂质不受氧自由基作用而发生过氧 化，具有保护细胞膜结构和功能完整的作用。本实验研究结 果显示，原花青素能显著抑制D．半乳糖致衰老小鼠脑组织中的 脂质过氧化，降低其MDA含量，提高SOD、GSH．Px等抗氧化 物酶的活性，表明LSPC对于D一半乳糖造成的氧化损伤有～ 定的保护作用。对于由D．半乳糖所致的衰老小鼠，原花青素能 显著增高抗氧化系统相关酶SOD、GSH—Px活性，降低MDA 含量，原花青素通过提高抗氧化酶活性和减少自由基的产生起 到延缓衰老的作用。