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| 松树皮中原花青素的提取 |
原花青素是指从植物中分离得到的一类在热
酸条件下能产生花青素的多酚化合物。是黄烷一3，
4一二醇和黄烷-3-醇的缩合聚集体，广泛存在于葡
萄、苹果、山楂的皮、核、梗以及黑荆树、马尾松、思
茅松、落叶松等植物中。[1-4]近年来研究报道原花青
素具有抗氧化作用和清除自由基能力、保护心血管
系统的功能、抗辐射作用、皮肤保健及美容作用等，
因而相关研究引起了人们的极大兴趣。同目前国际
上关于原花青素的测定还没有统一的标准方法，一
般采用紫外分光光度法、HPLC—MS法、香草醛一盐
酸法、钼酸铵分光光度法、硫酸高铁铵分光光度法
等。问黄山地处丘陵地带，松树资源丰富，若松木的
深加工技术得到发展，那么相关研究将对黄山地区
经济的发展起到推动作用。
1 材料与仪器
1．1 材料
松树皮；香草醛(AR)，国药集团化学试剂有限
公司；(+)一儿茶素，成都曼斯特生物科技有限公司；
甲醇(AR)，宜兴市辉煌化学试剂厂；无水乙醇(Art)，
中国宿州化学试剂有限公司；浓盐酸(Art)，中国宿州化学试剂有限公司：其它试剂均为分析纯。
1．2 仪器
DF一1010集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市
予华仪器有限责任公司)；T6-新世纪型紫外可见分
光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。
2 实验原理
2．1 标准溶液的配制
精确配制系列(+)一儿茶素标准溶液：20~g／ml、
40~g／ml、60~g／ml、80~g／ml、100~g／rrd。
2．2 工作曲线的绘制
分别用移液管量取5ml不同浓度的(+)一儿茶素
标准液，3ml香草醛甲醇溶液、1．Sml浓盐酸于20ml
试管中，加塞摇匀，于30~C水浴中避光反应30min。
然后在500nm处测其吸光度，以甲醇溶液代替样品
溶液做空白对照。根据样品溶液浓度与吸光度的关
系，做标准工作曲线(如图1)并拟合出回归方程：
y=O．0028x+0．0022 (R2=0．9976)
式中：x一标准样品浓度(~g／m1)
v一吸光度
3 实验方法、结果与讨论
3．1 单因素实验f7一蜘
3．1．1 乙醇浓度的选择
称取5份质量为1．0g研碎的松树皮，分SUeD入
30％、40％、50％、60％、70％的乙醇各25rnl。在60℃ 的
水浴条件下浸提50min，然后测定其吸光度(如图
2)。从图中可以看出，随着乙醇浓度的升高，溶液的
吸光度逐渐增大，在乙醇浓度为50％1t,-j"吸光度达到
最大值，当溶液的浓度大于50％后吸光度又逐渐变
小。这是因为乙醇浓度过大时，会增加脂溶性杂质
的溶出，对原花青素的提取造成不利的影响。所以，
在浓度为50％的时候，原花青素的提取率最高。
3．1．2 提取时间的选择
称取5份质量为1．Og研碎的松树。每份加入
0％的乙醇溶液25ml。在60~C的水浴中分别加热浸
提30min，40min，50min，60min，70rain。取样品测定
其吸光度。如图3可以看出，在30rain到40min时
候，溶液吸光度变化较小。在40min到50rain时，吸光度有较大升高，50min以后，吸光度开始下降，这
可能是提取时间过长，溶剂的作用导致原花青素的
结构发生破坏。所以，最佳提取时间为50min。
3．1．3 提取温度的选择
称取5份质量为1．Og研碎的松树皮放入烧杯
中，每份加入50％的乙醇溶液25ml，分别在30~(2、
40oC、50~(2、60~(2、70~C浸提取50min。取样品测定其
吸光度，如图4可以看出，吸光度随温度的升高整
体保持上升趋势，但是在30~(2—60~C吸光度上升较
快，60~(2以后吸光度上升缓慢，趋近平行，从能耗角
度分析，提取温度在6O℃最佳。
3．1．4 料液比的选择
称取6份质量为1．Og研碎的松树皮放人烧杯
中，分别加入50％的乙醇溶液15ml、20ml、25ml、30ml、
35ml、40ml。在60~(2的水浴中进提取50min。取样品
测定其吸光度，如图5可以看出，在料液比为1：15
到1：25之间，吸光度有下降趋势，但很平缓。从1：25
开始，吸光度随料液比的增加而增加，但是整体增
加缓慢，此时原花青素已基本全部溶解出，再增加
溶剂用量，不但提取率变化不大，还可能给后面的研
究带来不便。因此，料液比为1：30时为最佳。
3．2 正交试验
在单因素试验的基础上，选取乙醇浓度、提取
晦时间、提取温度以及料液比为考察因素，以原仡青
素的提取率为指标，采用L9(3 )进行正交试验．因
素水平选取如表1，正交实验结果及分析见表2，方
差分析见表3。
根据表2及表3分析：方差R温度>时间>浓
度>料液比，F值温度>时间>浓度>料液比。所以上
述条件中．对试验中提取率影响最大的分别是温度
和时间。
根据表2得最佳提取工艺是：浓度为60％。温度
65oc，时间50min，料液比1：40。
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