| 当前位置 : 首 页 >> 原花青素 >> 正文阅读 |
 |
| 葡萄籽原花青素对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究 |
肝移植、肝外伤及肝、胆、胰肿瘤手术时，常采
用肝门阻断术的方法以控制和减少肝叶切除时的出
血，但肝门阻断一再开放后或供肝的保存及其随后的
再灌注损伤，是导致术后肝脏功能不良的重要因素。
肝脏缺血再灌注时氧自由基可引起肝细胞膜、线粒
体膜、微粒体膜以及溶酶体膜发生脂质过氧化，产生
脂质过氧化物及其降解产物，可进一步加重生物膜
的损伤，破坏生物膜的稳定性和完整性，使其通透性
增加，最终导致肝细胞坏死[1]。而药物预适应是减
轻缺血再灌注损伤的有效方法之一。本研究在实验
大鼠肝缺血再灌注模型上，采用葡萄籽原花青素
(grape seed proanthocyanidins，GSP)进行干预，来
探讨葡萄籽原花青素对肝缺血再灌注损伤的保护作
用及其可能机制。
1 材料与方法
1．1 实验动物、试剂与仪器Wistar大鼠24只雌
雄各半，体重180～220 g，购自新疆医科大学实验
动物中心；药物试剂：葡萄籽原花青素(原花青素含
量≥95 ，为棕红色粉末，使用时用双蒸水溶解，购
白天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，批号：
JF-2OO9O326)；黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，硫
代巴比妥酸法检测MDA含量，试剂盒均购自南京
建成生物工程研究所(批号：20090917)，严格按测定
步骤操作试剂盒。美国Beckman Coulter Unicel
DXC一800(新疆医科大学第一附属医院检验科)全自
动生化分析仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶
(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量。
1．2 实验动物分组、模型制备和预处理实验动物
随机分3组：每组8只，分别为假手术组、缺血再灌
注组、葡萄籽原花青素预处理组。术前12 h禁食，自由饮水，腹腔注射20 乌拉坦5 ml／kg麻醉，腹
正中切口，分离显露肝门部，剪左中肝叶各韧带，游
离左、中肝叶的胆管及门静脉、肝动脉分支。用无创
伤血管夹夹闭供应肝左外叶、肝中叶之门静脉及肝
动脉分支，造成7O 肝脏缺血[2]。阻断后可见被阻
断区肝叶颜色由鲜红色变为暗红色表明肝脏缺血成
功，缺血30 rain后松夹再灌120 min形成肝缺血再
灌注模型。假手术组只手术而不做夹闭；原花青素
预处理组术前用原花青素300 mg／kg灌胃[3]，每天
1次，连续10 d，假手术组和缺血再灌注组术前用同
等剂量生理盐水灌胃10 d。
1．3 标本采集各实验组大鼠于腹主动脉取血制
备血清，取缺血区肝叶于冰生理盐水中洗净血液。
然后立即放入一7o℃低温冰箱保存待检，离心完后
的血清放入一40℃低温冰箱保存待检。
1．4 统计学处理 所有数据使用SPSSI6软件处
理，数据结果以均数±标准差( 士 )表示，采用t
检验，检验水准a一0．05。
2 结果
2．1 大鼠血清SOD的活性、MDA 的含量的变化
缺血再灌组与假手术组比较SOD活性下降(P
d0．01)，MDA含量升高(P d0．01)；原花青素预
处理组与缺血再灌注组比较SOD活性升高(P<
0．01)，MDA含量降低(P<0．05)，见表1。
2．2 大鼠肝脏SOD的活性、MDA 的含量的变化
缺血再灌组与假手术组比较SOD活性下降(P
d0．01)，MDA含量升高(P d0．01)；原花青素预
处理组与缺血再灌组比较S0D 活性升高(P<
0．01)，MDA含量降低(P d0．05)，见表1。
2．3 大鼠血清ALT、AST含量变化 缺血再灌组
与假手术组比较AST、ALT含量升高(P d0．01)；
原花青素预处理组与缺血再灌注组比较AST、ALT
含量降低(P d0．05)，见表2。
3 讨论
缺血一再灌注损伤(ischemia／reperfusion injU—
ry，RI)是现今研究的热点问题之一。理论研究和
临床实践都证实，在血液供应阻断30min以上就会
引起各细胞器超微结构的改变和功能障碍，导致细
胞不可逆的损伤乃至死亡，及时恢复血液供应被视
为挽救这部分组织的重要措施。然而，大量的动物
实验和临床观察发现，在成功恢复血流后，部分情况
下反而使组织损伤加重，即RI【4]。研究表明其发
生机制可能与多种因素有关[5]：氧自由基、钙超载、血管内皮细胞、一氧化氮、热休克蛋白、中性粒细胞
和细胞凋亡等因素均可能参与RI的发病过程。
本研究结果显示，缺血再灌注组血清S0D活性
显著减弱，同时伴随MDA水平升高。提示缺血再
灌注时产生大量的因S()D活性降低导致氧自由基
清除不足并引发脂质过氧化反应。而原花青素预处
理组的SOD活性高于缺血再灌组MDA含量低于
缺血再灌组，这同葡萄籽原花青素具有极强的抗氧
化活性是一致的。葡萄籽原花青素(GSP)是从葡萄
籽中提取的一类天然多酚化合物，有很高的生物活
性和药理作用。国内外的研究证实，GSP具有极强
的抗氧化活性，是一种很好的自由基清除剂和脂质
过氧化抑制剂 ，具有抗炎、抗肿瘤及保护心肌细胞
等作用_7]，还能明显改善衰老小鼠的学习记忆功
能¨8]。由于葡萄的产量高，副产品葡萄籽的再利用
性强，加上天然抗氧化剂的市场需求量大，GSP的
研究开发有着广阔的前景，GSP具有降低氧自由基
从而降低脂质过氧化的作用。同时，肝缺血一再灌注
期间，血清AI T、AST亦呈同步性上升，AI T升高
表示细胞膜受损，AST升高表示了线粒体膜的损
伤。原花青素预处理组ALT、AST含量有降低的
表现，表明GSP预处理组可能有稳定细胞膜的作
用，当细胞内氧自由基减少时减轻了脂质过氧化反
应，从而减少了细胞膜基本特性改变和酶活性丧失，
缓解了肝缺血时线粒体受损引起氧化磷酸化过程障
碍和ATP合成急剧下降，使各种离子泵的功能得
以维持，保持细胞离子稳态，减缓了细胞急剧水肿和线粒体的肿胀、破裂，从而稳定了细胞膜和线粒体
膜，减少了ALT和AST的溢出。以上实验结果表
明葡萄籽原花青素可通过提高机体抗氧化能力，降
低体内氧自由基水平、减轻脂质过氧化反应，有效地
防治肝脏缺血再灌注损伤。
|
|
|
|
