我们采用层析用的硅胶(100—200目)进行湿 法装柱，通过实验，找到了最佳的柱分离条件：硅胶 与混合物的重量比=150：1；层析柱长与直径的比= 23：1；淋洗剂比例：石油醚(6O一9O℃)：乙酸乙酯 (v／V)=17：1；减压淋洗。通过上述的改进，可以又 快又好的分离大黄酚和大黄素甲醚，大黄酚和大黄素甲醚的纯度可达99％ 以上。

 1 实验部分

 1．1 仪器和试剂

 层析用硅胶(100—200目)(青岛海洋化工 厂)；硬质玻璃层析柱(95×3．5 cm)；岛津uV．300 紫外分光光度仪；大黄酚、大黄素甲醚对照品(中国 药品生物制品所提供)，所用溶剂均为分析纯。

 1．2 样品制备

 参考方法 分离得到大黄酚和大黄素甲醚的 混合物，取该混合物1 g溶于最低量的氯仿，加入少 量层析用硅胶，拌匀，减压蒸干氯仿，准备上柱。

 1．3 柱的制备

 本实验采用湿法装柱。取层析用硅胶(100— 200目)150 g，加500 mL石油醚，搅拌均匀后放置2 h以上。关死层析柱下口，用以锥型漏斗将溶胀后 的硅胶和石油醚搅匀成浆，一次均匀加入层析柱中， 自然沉降。

 柱装好后静置一夜，然后缓慢打开下口，控制流 速从漫到快(1—5 mL／min)，待石油醚与柱上端相平 时，再用洗脱液平衡柱体，直到硅胶层不再下降为 止。待洗脱液与柱上端相平时，加入制备好的待分 离样品。

 1．4 样品分离

 样品上样后，加上一层石英砂，洗脱剂为石油醚 (6O一9O℃)：乙酸乙酯(V／V)=17：1的混合溶剂， 开始流速为6 mL／min，然后减压过柱，先出峰为大 黄酚，后出峰为大黄素甲醚。分别收集，回收溶剂， 再用乙醇进行重结晶，得到的大黄酚和大黄素甲醚 用高效液相色谱进行测定，知大黄酚和大黄素甲醚 的纯度在99％ 以上。

 2 结果和讨论

 2．1 硅胶的选择

 大黄酚和大黄素甲醚的分离，国内已有报道。 有人将样品装样于先经预处理的一定粒度的磷酸氢 钙层析柱的上端，然后用然后用苯[3 或石油醚 洗脱，操作繁琐、费时，且苯的毒性较大；孙阳等 改用薄层硅胶进行分离，该法洗脱剂流速太慢，并且 易产生各成分间的交叉，很难在短时间内将大黄酚 和大黄素甲醚分开；陈广耀等 用0．2％ 一0．8％和 0．9％ 一3％的NaOH分别对大黄酚和大黄素甲醚的 乙酸乙酯溶液进行萃取，然后进行酸沉，过滤，用乙 醇进行多次重结晶等步骤进行分离纯化大黄酚和大 黄素甲醚，该法分离的大黄酚和大黄素甲醚的纯度 不高，而且乙酸乙酯的损失极大，因此该法很不可 取。经多次实验，我们发现用层析用硅胶(100— 200目)效果最好。

 2．2 洗脱剂的确定

 洗脱剂比例的选择直接影响到分离的效果。经 薄层板对展开剂比例的选择发现：最佳的洗脱剂比 例为：石油醚(6O一9O℃)：乙酸乙酯(V／V)=17：1 的混合溶剂，而非孙阳 和王珲春 等说的石油醚 (6O一9O℃)：乙酸乙酯(V／V)为15：1或其他比例， 这时大黄酚和大黄素甲醚的R，值相差最大为0．23，其他的比例均小于该值。反复的柱层析实验也证明 如此。

 2．3 层析硅胶和分离样品量的比例

 通过实验，我们发现硅胶与样品的质量比为 150：1时，分离效果最佳。这个比值太小，难以将大 黄酚和大黄素甲醚分开；太大峰形扩散严重。

 2．4 柱高和柱直径的比例

 有效柱高和其直径的比例为23：1时，分离效果 最佳。同质量比一样，太小难以将大黄酚和大黄素 甲醚分开；太大峰形扩散严重。

 2．5 流速和压力的影响

 在常压下，流速过快分离效果差；加压可以提高 流速，但分离效果差，大黄酚和大黄素甲醚很快产生 交叉，因为两者的受力不一样，后面的成分先受力， 前面的成分后受力，相当于有一个推力将后面的成 分推到前面去；减压效果又快又好，因为前面的成分 先受力，后面的成分后受力，相当于有一个拉力将前 面的成分拉着先走。

 2．6 铁离子能与大黄素甲醚形成络合物¨引，5O℃ 下加热能使其结构破坏。因此整个过程应避免与铁 离子接触。

 3 结论

 3．1 选用层析用硅胶(100—200目)装层析柱比薄 层硅胶分离效果好。

 3．2 洗脱剂最佳比例为石油醚(6O一9O℃)：乙酸 乙酯(V／V)=17：1。

 3．3 硅胶与混合物的质量比=150：1，有效柱高和 其直径的比例为23：1时柱效最高，分离效果最好。

 3．4 减压淋洗分离效果最好，常压次之，加压最 差。

 3．5 掌握上述最佳条件，可以分离更多量的样品。