关键词:瘀血证 单核细胞 趋化游走 原儿茶醛 病理生理 中药 治疗

 原儿茶醛是活血化瘀中药丹参、鼠尾草和四季 青叶等的有效成分之一。为研究其药理机制，课题 组观察了原儿茶醛对瘀血证患者的单核细胞趋化 游走能力的影响。

 1 材料与方法

 1．1 临床资料

 瘀血证患者18例，为瘀血证组。原发疾病均为 冠心病。冠心病诊断标准：按照1980年全国内科学 术会议《关于冠心病命名及诊断标准的建议》。中医 辨证标准，血瘀证诊断按照1988年血瘀证研究国 际会议制定的《血瘀证诊断参考标准》，虚证按照 1986年全国中西医结合虚证与老年病研究专业委 员会制定的《中医虚证辨证参考标准》。健康人18 例为对照组，年龄性 0比例与瘀血症患者近拟。

 1．2 试剂、药物

 趋化剂fMLP(F3506 Sigma)， 199培养基 (Gibeo)，48孔微小趋化室(AC一48)及聚碳酸酯膜 (Neuro Probe)， 24孑L Transwell共培养体系 (Corning Costar)，胎牛血清(中国医学科学院血液 病研究所)，胰酶(Difco)，缓冲液(HBSS pH7．25)， 淋巴细胞分离液(血研所)，原儿茶醛(卫生部药品 生物制品检定所)，人类脐静脉内皮细胞(HUVEC) 系(ATCC)。

 1 3 方法

 分离外周血单核细胞(Peripheral blood mono— nuclear cells PBMNC)：用淋巴细胞分离液分离PBMNC，依据血液来源将PBMNC分为两个大组： 瘀血症组和对照组，每大组又分为非处理和原儿茶 醛(Protocatechuic aldehyde，PcA)处理组(简称 PCA组)

 PCA处理组在37℃ 条件下，加入PCA40 g／ mL，处理15分钟。

 PBMNC跨越聚碳酸酯(Polycarbonate，PC)膜 趋化游走实验：在48孑L微小趋化室之下室内加入 1×加。M ×25 l fMLP，各上孑L内按分组加入 PBMNC 2×1 细胞／mL，90分钟孵育后，取下PC 膜，Giemsa法染色，在10×40倍光镜下，随机选择 3个视野，计数目镜下C5型网形方格尺覆盖范围内 PBMNC细胞数，求出3个视野的平均数。

 PBMNC跨越HUEVC单层趋化游走实验}将 HUVEC接种至Transwell Insert底膜上培养，形 成完整的HUVEC单层后，将Insert移人一个含有 1×10。M fMLP 10％胎牛血清199培养液小孔内， 再将非处理组和PCA组PBMNC2×10 细胞 1 mL、0．5 mL加入相应Insert内，120分钟孵育 后，计数进入下室的细胞数。

 统计方法：用t检验分析各组数据差别的统计 学意义。

 2 结果

 2．1 跨越PC膜趋化游走实验

 瘀血证患者PBMNC趋化游走的数目(细胞 数／ 大方格)30 88显著高于对照组18．94，P <0．01；瘀血证组和对照组PBMNC经PCA处理 后，趋化游走的数目显著少于非处理组，P<0 O1。 见表1。

 裹1 备组PBMNC跨越PC膜趋化游走的数目( ±s)

 注：★与对照组比较P<0 O1．A与PCA组比较．P<0 0i

 2．2 跨越HUVEC单层趋化游走实验

 瘀血证组PBMNC趋化游走数目25．4l非常 显著高于对照组l8．44，P<0．01；瘀血证组和对照 组PBMNC经PCA处理后，趋化游走的数目显著 少于非处理组，P<0．05。见表2。

 裹2 备组跨越HUVEC单屡趋化游走的数目( ± )

 往： 与对厢组比较P<0．0l，△与PcA组比较．P<0．0l

 3 讨论

 根据中医理论，血行不畅，壅遏于经脉之内，或 血溢脉外不能及时排出和消散均为瘀血。瘀血证是 多种疾病发展一定阶段的一个病理综合征，与现代 医学动脉硬化(As)、血液循环特别是微循环障碍有 相似之处。Ross的AS学说认为，血管内皮细胞损 伤后，受趋化因子的吸引作用，单核细胞和平滑肌 细胞向血管内皮趋化游走，吞噬脂质后变成泡沫细 胞是形成AS性脂纹和斑块的重要事件之一。中医 认为，久病多瘀，各种疾病，特别是慢性感染性疾病，在病源体和人体免疫系统的相互作用下形成抗 原一抗体复合物，可能损伤血管内皮而导致上述一 系列病理反应，形成AS(瘀血证)，所以由单核细胞 趋化游走能力增强参与的AS形成过程可能是瘀血 证形成的机制之一，瘀血证可能属于机体的一种慢 性炎症反应。

 由实验结果可知：瘀血证患者单核细胞趋化游 走能力增强，也可以印证以上假说。另外，在单核细 胞趋化游走之前，有一个与管内皮粘附的过程，大量 单核细胞粘附于血管内皮，和动脉硬化斑块一样能 增加血流的阻力，可能也是形成瘀血症的原因之 一 。

 原儿茶醛是丹参、鼠尾草和四季青叶等活血化 瘀药物的主要成分之一，具有扩张冠状动脉，降低心 肌耗氧量“‘，抑制血小板聚集 ，抗炎“ ，清除自由 基和脂质氧化口’等作用。本实验结果：原儿茶醛能降 低单核细胞的趋化游走能力，提示这可能是其活血 化瘀的机制之一。