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| 复方丹参含片中原儿茶醛含量的测量不确定度分析 |
测量不确定度是“表征合理地赋予被测量值的
分散性，与测量结果相关联的参数”，它是被测量客
观值在某一量值范围内的一个评定，不确定度越小，
测量结果的质量越高，使用价值越大。测量不确定
度对实验室问比对，测量结果临界值的判断，方法的
确认以及检测工作国际化等方面，都有重要的意义。
本文根据《测量不确定度评定与表示》(JJ—
F1059—1999)、《化学分析测量不确定度评定》
(JJF1135-2005)和《化学分析中不确定度的评估指
南》(CNAS—GL06：2006)中有关规定对复方丹参含
片中HPLC法测定原儿茶醛含量的测量不确定度进
行了分析，以期找出影响不确定度的因素，对不确定
度进行评估，为评价检测报告提供科学依据。
1 仪器与试药
HP1100型系列高效液相色谱仪(美国)，包括G1322A在线脱气，G1311A四元梯度泵、G1316A柱
温箱、G1315B二极管阵列检测检测器；AE-240电子
分析天平(瑞士Mettler)；KQ-250B型超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司)。
原儿茶醛对照品(批号110810-200506，购于中
国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯(德国Mer—
ck)；水为超纯水(韩国Power Iplus超纯水系统)，其
余试剂均为分析纯。
2 实验方法
2．1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2(4．6 mill×200 mm，5
)；流动相：甲醇一1％冰醋酸=15：85；检测波长：
280 Bin；流速：1．0 ml_／min。理论板数按原儿茶醛峰
计算应不低于3000。
2．2 对照品溶液的制备
取原儿茶醛对照品约1O mg，精密称定，置5O
mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量
取5 mL，置50 mL量瓶中，加50％ 甲醇至刻度，摇匀，即得。
2．3 供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定，研细，取约0．4 g，精密
称定，置具塞锥形瓶，精密加入50％ 甲醇25 mL，称
定重量，超声处理15 min，放冷，再称定重量，用50％ 甲
醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2．4 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2O
，注入液相色谱仪，测定，利用外标法计算含量。
3 不确定度分析
化学分析中测量不确定度的评估过程主要有以
下几个步骤 4。：被测量量的技术规定；确定和分析
不确定度来源；量化不确定度；合成标准不确定度的
计算；扩展不确定度的给出；报告测量结果及不确定
度。下面按这几个步骤对本次实验的测量不确定度
进行评定和表示。
3．1 被测量量的技术规定
主要说明被测量量，建立数学模型。本法为外
标法测定样品中原儿茶醛成分的含量，其数学模型
为(假设直线过原点)：
P： 等 ×F×1000[mr／)~f]
式中，P为样品中原儿茶醛的含量mr／片；As为
样品的峰面积响应值；Mr为对照品的取样量g；
为样品溶液的体积mL；Ar为对照品的峰面积响应
值；Ms为样品的取样量g；Vr为对照品溶液的Ar；W
为平均片重g；F为样品非均匀性校正因子系数，值
为l；1000：g换算为mg。
3．2 识别和分析不确定度来源
3．2．1 质量(M)
样品和对照品的质量皆由增量法称量给出。称
量不确定度主要来自3个方面：①称量的重复性，可
以通过多次重复测量读数，计算得出，属A类不确
定度；②天平称量最大允差引入的不确定度，属B
类不确定度；③ 校准产生的不确定度，属B类不确
定度。
3．2．2 体积(V)
容量瓶与移液管中的溶液体积主要有3个不确
定度来源：① 重复性，溶液充满容量瓶(或移液管)
至刻度的变化，属A类不确定度，可通过多次测定
而得；②容量瓶允差，确定容量瓶内部体积时的不确
定度，属B类不确定度；③温度系数引起的不确定度，属B类不确定度，由于本文中测定温度为20
℃ ，与校准时温度一致，故此项可忽略。
3．2．3 HPLC峰面积响应值
主要由峰面积重复性与仪器环境、进样体积等
其它因素的不确定度共同引起。峰面积重复性为A
类，可通过多次测定而得；仪器环境、进样体积等的
其它因素引起的不确定度为B类，由于对照品与供
试品峰面积是在相同条件下测得，所以此项忽略。
3．2．4 样品均匀性
即样品测量的重复性，样品的研磨和取样会影
响含量测定结果的差异，其产生的不确定度可以通
过多份样品的含量测量来求得，为A类不确定度。
3．2．5 对照品纯度
对照品原儿茶醛购自中国药品生物制品检定
所，由于尚无法得到不确定度参考值，故此项忽略。
不同的因素及其影响见图1。
3．3 不确定度分量的量化
3．3．1 Mr对照品的取样量为0．01049 g，对照品称
量的不确定度U(Mr)=0．015 mg，相对不确定度U
(Mr)=O．015 mr／10．49 mg=0．00143。
3．3．2 Ms样品的取样量为0．4000 g，样品称量的
不确定度u(Ms)=0．15 mg，相对不确定度U (Ms)
= 0．15 mg／400 mg=0．000375。
3．3．3 Vs样品溶液体积的不确定度，25 mL单标
线移液管的不确定度U(VS)=0．005 mL，相对不确
定度U (VS)=0．005 mL／25 mL=0．0002。
3．3．4 Vr对照品溶液体积的不确定度，50 mL容
量瓶定容两次，50 mL容量瓶体积的不确定度U
(Vr1)=0．005 mL，相对不确定度U (Vr)=0．005
mL×2／50 mL=0．0002；5 mL单标线移液管体积的
不确定度u(Vr2)=0．0025 mL，相对不确定度U
(vr2)=0．0025 mL／5 mL=0．0005。对照品溶液体
积的相对合成不确定度为：U (Vr) =0．0002 +0．0005 =2．9×10一，u (Vr)=0．000539。
3．3．5 As通过测定峰面积多次，计算样品峰面积
平均值为4199，峰面积不确定度U(As)=8．356，其
相对不确定度为u (As)=8．356／4199=0．00199。
3．3．6 Ar通过测定峰面积多次，计算对照品峰面
积平均值为1745，峰面积不确定度U(Ar)=3．507，
其相对不确定度为u (Ar)=3．507／1745=
0．00201。
3．3．7 w称取2O片，得平均片重0．4034 g，平均片
重的不确定度u(W)=0．00184 g，相对不确定度u
(W)=0．00184 g／0．4034 g=0．00456。
3．3．8 F依照“2．3”项下方法平行配制三份样品溶
液，分别进行测定，计算样品重复性不确定度u=
0．009 mg，相对不确定度U =0．009 mg／1．273 mg=
0．00707，F相关不确定度据此折换为u(F)=U (F)
= 0．00707。
各数值和不确定度见下表。
3．5 扩展不确定度的给出
取置信概率为95％ ，包含因子k=2，将相对合
成标准不确定度乘以包含因子得到相对扩展不确定
度，u(P)=0．01l×2=0．022 mg。
3．6 报告测量结果及不确定度
复方丹参含片中原儿茶醛的含量为：P=
(1．273-I-0．022)mg，其中“±”后的数是扩展不确定
度U=ku(P)，由u(P)=0．011 mg和k=2确定k=
2是根据置信概率为95％ 由t分布确定的。
4 讨论
4．1 考虑到样品的不均匀性，在计算公式中加人了均匀性因子，其作用是将样品不均匀性产生的不确定
度带人公式，而与计算结果无关，所以设其值为1。
4．2 对图2的分析表明，样品均匀性，片重差异和高
效液相色谱仪的性能引人的不确定度较大，为不确定
度的主要来源，其中样品均匀性影响最大，因此在分析
测定时应加以严格控制，充分研磨样品并混合均匀。
4．3 本文提供了一种检测结果测量不确定度计算
的方法和思路，可以推广用于液相色谱法测定成分
的含量，分析引入的分量，找出影响较大的因素并在
以后的实验中加以注意和改进，以期得到高质量的
测量结果。
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