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| 大黄酸对人血红细胞溶血的抑制作用研究 |
当前医学研究中肿瘤、冠心病和衰老是占前三位的研究领域。
它们都与自由基引起的膜脂质损伤有关f】1。自由基特别是活性氧的
促癌作用日益受到重视。现已发现癌变的两个阶段(诱癌与致癌)都
有氧自由基的参与。许多报道也指出 ，多数心血管疾病都可能起因
于自由基作为细胞损伤的介质。自由基可引起血管的收缩和舒张，
G1glewski指出02-"可以灭活内皮舒张因子【EDRF)，诱导血管收缩。
而HO促进内皮依赖的血管舒张。此外，自由基还与糖尿病、白内障、
类风湿性关节炎，红斑狼疮，甚至近年来蔓延很快的艾滋病有关。本
文旨在研究大黄酸和AAPH自由基的反应；以及由此引发人血红细
胞溶血抑制的反应动力学。
1 资料与方法
人血红细胞由徐州中心血站提供。做溶血前用含有137 mmol
L一1 NaC1，2．7 mmol L一1 KC1，8．1 mmol L一1 Na2HP04和1．5 mmol
L一1 KH2P04的磷酸缓冲溶液(PBS，pH 7．4)，洗涤三次。离心机转速
为2000转／rain离心10min，得到红细胞。将红细胞加入pH 7．4的
PBS中配成浓度为5％的红细胞悬浮液，于37℃育温5min，然后加入
适量的AAPH水溶液引发溶。溶血程度通过分光光度法测定[31。取适
量的反应混合液，用O．15 mol L一1 NaC1稀释，以2000转／min的转速
离心10min将红细胞分离，取上清液在紫外可见分光光度计上波长
540nm处测其吸光值A；同样地取适量的反应混合液，用蒸馏水稀释
使红细胞完全溶血，同样条件下测其吸光值B，百分溶血度等于(A／
B)x100。在抗氧化实验中抗氧化剂在AAPH加入以前先加入并且育
温。每次实验至少重复3次，实验误差在10％以内。实验数据见图
1，2。
2 结果
2．1图1验证了不同浓度的大黄酸(a1O；b 5~moYL；C lOl~mol／L；d：
15~mol／L；e：20~mol／L)抑制AAPH(501~mmol／L)诱导人红细胞溶
血的作用，从图中可以看出，随着大黄酸浓度的不断增加，抑制红细胞溶血的抑制期越长，即其抑制AAPH诱导人血红细胞溶血的时间
越长。
2．2利用紫外吸收光谱研究了大黄酸和AAPH在水相中的反应(图
2)，得出大黄酸可以直接和AAPH自由基反应的结论。从图中可以
看出450nm处的吸收随着时间不断降低。
3 讨论
生物膜是细胞的重要组分，具有特殊的功能，参与物质运输、信
息传递、能量转换、细胞识别。生物膜(细胞膜、线粒体膜、微粒体膜)
的脂质双分子层含有大量的多元不饱和脂肪酸(PUFA)，而磷脂双分
子层中间是非极性基质区。O 在非极性基质中的溶解度要比极性区大7～8倍，再加上过渡金属络合物如含铁血红蛋白的存在，为脂质
过氧化创造了环境。因此自由基引发的脂质过氧化导致细胞膜的迅
速破坏。AAPH在红细胞的水分散溶液中经热分解产生引发的自由
基(R·)，它可以进攻红细胞膜中的不饱和脂肪酸(I )引发脂质过氧
化。由于脂质过氧化是一个自由基链式反应，一个自由基能够引发
多达20个链增长反应，因此红细胞膜会迅速被破坏而导致溶血。
作用很强的自由基清除剂和脂质过氧化抑制剂，对多种自由基有广
谱清除作用，能够利用抗氧化和清除自由基的能力抑制疾病的发生
和发展。实验表明，大黄酸对大鼠脑匀浆脂质过氧化或Maillard反应引起的极弱化学发光均有淬灭作用，该作用强度与丙二醛的抑制率
存在线性关系。
本研究显示相同实验条件下，因大黄酸的浓度不同在抑制
AAPH溶血过程中体现不同的浓度依赖，即浓度越高，溶血的抑制期
越长。利用紫外吸收光谱研究大黄酸和AAPH在水相中的反应，得
出大黄酸可以直接和AAPH自由基反应抑制红细胞溶血的结论。
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