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| HPLC法测定加味八珍益母颗粒中盐酸水苏碱的含量 |
加味八珍益母颗粒是由益母草、赤芍等15昧
中药经加工制成，用于妇女气血不足，月经不调
(经期后移或经行不畅，量少，经闭)，产后恶露不
净，腹痛等。益母草中的主要成分为盐酸水苏碱。
现有文献中益母草的定量方法主要为雷氏盐剩余比
色法测定益母草中总生物碱量的定量方法(以盐酸
水苏碱为对照)及TI CS法，其中雷氏盐剩余比
色法u 供试品制备过程复杂，干扰因素多，不利
于准确的测定指标成分的含量；TLCS[3 为一种离
线技术，其各步操作基本上是在开放体系中进行，
因此影响定量结果的因素较复杂，准确性差，为了
有效控制制剂的质量，本文采用高效液相色谱法测
定加味八珍益母颗粒中君药益母草中盐酸水苏碱的
含量。该方法系统适用性强，为控制加味八珍益母颗粒的质量提供了依据。
1 仪器与试药
WATERS1525高效液相色谱仪(美国)；
WATERS Empower 2色谱工作站(美国)。
盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定
所，批号：110712—200405)；加味八珍益母颗粒
(辽宁某制药有限公司， 批号：20070301，
20070302，20070303)；水为三次重蒸馏水，其余
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Waters Spherisorb强酸型阳离子交
换色谱柱(4．6ram × 250mm，5 m)；柱温：
3OoC；检测波长：190nm；流速 1．0mL·rain ；流动相：0．05mol·L 磷酸二氢钾溶液一三乙胺
(100：0．1) (磷酸调节pH值至2．6)；进样量：
10mL~理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于
4000，分离度大于1．5。
2．2 供试品溶液制备
取装量差异项下的本品内容物，研细，取约
0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇
50mL，称定重量，超声处理(功率300W，频率
50kHz)30min，放冷，再称定重量，用乙醇补足
减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液
20mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加少量乙醇使溶
解，加于活性炭一中性氧化铝柱(活性炭：氧化铝
一1：3，活性炭60~100目，氧化铝100~150目，
内径1．5cm，活性炭在上，湿法上柱)，用乙醇洗脱，收集洗脱液约80mL，蒸干，残渣加流动相溶
解，并转移至5mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，
摇匀，即得。
2．3 对照品溶液的制备
精密称取盐酸水苏碱对照品10．01mg，置
50mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，制成每1mL
含盐酸水苏碱0．2002mg的溶液，即得。
2．4 阴性样品溶液的制备
按处方中各药味(益母草除外)及辅料的比例
制成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性
对照溶液。吸取阴性样品溶液、对照品溶液及供试
品溶液各10 L，注入高效液相色谱仪，结果阴性样
品溶液色谱图在与对照品色谱图相同保留时间处未
显色谱峰，故认为阴性对照无干扰。见图1。
2．5 方法学考察
2．5．1 线性关系考察
精密称取盐酸水苏碱对照品10．48mg，置
25mL量瓶中，加乙醇制成每1mL含盐酸水苏碱
0．4192mg的溶液。分别精密吸取盐酸水苏碱对照
品溶液2、5、8、10、15、20tLL，注入液相色谱
仪，测定峰面积，以对照品进样量( )为横坐标，
以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：
Y一9．61447×10 X+ 1．2513×10。 r= 0．9999
结果表明，盐酸水苏碱在0．8384～8．384t~g范围
内，线性关系良好。
2．5．2 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液10tLL，连续进样6
次，测定峰面积，测定结果为：519836，526412，
519452， 520364， 520314， 518740， RSD 一
0．54 ，结果表明精密度良好。
2．5。3 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液10t~L，在0、2、4、
6、8、10h分别进样，测定峰面积，测定结果为：
519836， 519874， 517858， 516875， 519785，
516247，RSD=0．32 。结果表明，供试品溶液在
10h内稳定。
2．5．4 重复性试验
取同一批号样品研细，取约0．5g，精密称定，
共取6份，按已确立的方法测定，测定结果为：平
均每袋含盐酸水苏碱为65．09rag，RSD为1．2 9／6
( 一6)，表明其重复性良好。
2．5．5 回收率试验
精密称取已知含量的同一批号(含量
6．4117mg·g。)样品粉末0．25g，分别精密加入
盐酸水苏碱对照品溶液(0．1621mg。mL )各
10mL，再精密加入乙醇40mL，按供试品溶液的
制备方法制备，再按上述色谱条件测定，计算回收
率，结果见表1。
2．5．6 样品含量测定结果
按“2．2”项下操作，在上述色谱条件下进样
分析，测定结果见表2
3 讨论
3．1 提取条件的选择
由于处方中药味较多，用乙醇提取后直接进样
分析，分离效果不好，本试验参考有关文献l_4]，采
用乙醇为提取溶剂，通过活性炭一中性氧化铝柱
后，达到了较好的分离。采用超声提取15、30、
40min，含量分别为51、64、64mg‘袋～。
结果显示超声提取30rain，盐酸水苏碱已提取
完全，因此确定超声提取时间为30min。
3．2 色谱柱的选择盐酸水苏碱在C18柱上的保留
能力很小，即使用水或磷酸盐溶液作为流动相，也
无法使其在色谱柱上获得足以供定量分析的保留时
间。曾采用氨基柱进行测定，但分离效果不好。而选用强酸型阳离子交换色谱柱，以离子型键合相为
分离基质，通过包含有离子交换在内的混合保留机
理，可以分离测定盐酸水苏碱。
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