| 番泻叶为豆科(Leguminosae)植物狭叶番泻 (Cassia angustifolia Vah1)及尖叶番泻(Cassia acutifo— lia Delile)的干燥小叶，性寒，味甘、苦。功能泻热行 滞，通便，利水。用于热结积滞，便秘腹痛，水肿胀 满。主要成分是番泻苷A及B、番泻苷C及D、芦荟大黄素双蒽酮苷、芦荟大黄素、大黄酸等。《中国药 典)2005年版一部含量测定项下目前仅是采用分光 光度法测定番泻叶中番泻苷B的含量，但番泻叶中 所含的芦荟大黄素亦有泻下作用 J，故尝试通过 HPLC建立番泻叶中芦荟大黄素的含量测定方法， 以对番泻叶药材内在质量有更加全面的控制，本检 测方法不仅简便、快速、准确性、重现性好，而且更 加稳定。
1 仪器与试药
仪器：WATERS 600-2996高效液相色谱仪。 WATERS 2996检测器，EMPOWER色谱工作站； MILLIPORE公司超纯水制备仪；METI’LER TOLEDO 电子天平；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器 (功率200 W，频率25 KHz)。
样品：番泻叶由广州奇星药业有限公司提供； 对照品：芦荟大黄素购于中国药品生物制品检定 所，批号为200504，纯度为90．4％ ，供含量测定用； 试剂：甲醇为色谱纯，其余为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件分析柱为Hypersil ODS2(200 mm ×4．6 mm，5 m)；以甲醇-0．2％磷酸溶液(70：30) 为流动相；流速1．0 ml／min；检测波长254 nm；柱温 30~C。理论板数按芦荟大黄素峰计算应不低于 4 000。
2．2 对照品溶液的制备取芦荟大黄素对照品适 量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含30 g的溶液， 即得。
2．3 供试品溶液的制备取番泻叶20 g，粉碎，过 3号筛，取2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加人甲 醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，用甲醇 补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，置锥 形瓶中，水浴蒸干，残渣加8％ 盐酸溶液15 ml，水浴 加热回流30 min，放冷，加氯仿20 ml，继续加热回流 1 h，立即冷却，转移置分液漏斗中，分取氯仿层，酸 水层再用氯仿振摇提取3次，每次20 ml，合并氯仿 液，80~C水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至20 Hll 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜 (0．45 Ixm)滤过，取续滤液，即得。
2．4 专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶 液各10 l，分别注人高效液相色谱仪，按含量测定 的方法测定。结果，供试品溶液色谱中，被测成分 在对照品溶液色谱相应的位置上，有相同的保留时 间的色谱峰。(见图1)。
2．5 线性考察精密称取芦荟大黄素对照品适量， 加甲醇定容至100 ml容量瓶中，超声使完全溶解， 制得芦荟大黄素对照品母液(浓度为0．1549 mg／ m1)。精密量取芦荟大黄素对照品母液1、2、4、6、8、 10 ml，分别置20 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇 匀。分别精密吸取10 ，注入高效液相色谱仪，记 录峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘 制标准曲线。回归方程：Y=3．78 X 104X一2．94 X 10— 3X，r=0．999 9，上述结果表明，芦荟大黄素进样量 在7．745—77．45 g范围内线性关系良好。
2．6 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，在上 述色谱条件下连续进样6次，测定芦荟大黄素峰面 积，结果RSD=1．5％ 。
2．7 重复性试验精密称取同一批番泻叶样品6 份，按供试品溶液制备方法制备，测定计算，RSD= 2．0％ 。结果表明本法重复性良好。
2．8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 l，分别在0、2、4、6、8、12 h进样测定，按供试品溶 液中芦荟大黄素含量计算，RSD：0．3％ 。结果表 明，供试品溶液在12 h内基本稳定。
2．9 加样回收试验取同一批已知芦荟大黄素含 量的样品(批号6008)6份，每份1 g，分别加入芦荟大黄素对照品母液(83．08 m1)各7．0 ml，挥干溶 剂，按供试品溶液的制备方法制备，测定，平均回收 率为96．13％ ，RSD为2．2％ 。结果表明本法回收率 比较好。(见表1)。
3 讨论
3．1 检测波长的选择取芦荟大黄素对照品扫描 测定，结果在254 nm处有最大吸收，因此选择254 nm为本品的测定波长。
3．2 色谱条件的考察试验中考察了依利特ODS2 (200 mm X4．6 mm，5 m)、迪马C】8(200 mm X 4．6 mm，5 m)、奥太C18(250 mm X4．6 mm，5 m)3种 品牌的色谱柱测定，结果无明显差异。流动相的考 察参考文献 j，分别用0．1％ 、0．2％磷酸溶液与甲 醇混合流动相溶解对照品，结果随磷酸浓度增高， 芦荟大黄素对照品的溶解度增加，因此确定流动相 为以甲醇-0．2％ 磷酸溶液(70：30)。柱温的考察， 分别考察了25 oC、30~C、40~C柱温对色谱分离的影 响，在一般情况下，随柱温升高，芦荟大黄素与杂质峰分离度下降，实际检验中应根据样品分离情况在 25cC一40cC范围内选择适宜的柱温。
3．3 超声、和水浴时间的考察，对超声处理20，30， 40 min，和水浴回流15，30，45 min制备的供试品溶 液进行考察。结果显示，超声处理30，40 min，水浴 回流30，45 min结果差异都不大，故选择超声处理 30 min，和水浴回流30 min。芦荟大黄素属于蒽醌
类，遇热易升华 j，故选择氯仿液在80o【=水浴蒸干。 |
