1 材料与方法

 1．1 细胞株培养及传代人肺癌细胞株A549购自 上海中科院细胞库。用含10％胎牛血清和双抗的 RPMI 1640培养液，在37℃ 、5％CO 的细胞培养箱中 培养，每2～3天传代1次。

 1．2 材料和设备芦荟大黄素购自美国Sigma公司，用二甲 基亚砜(DMSO)配制成20 g／L浓度，一20℃避光保存， 临用前以培养基稀释为相应浓度；RI，MI 1640培养基 和胎牛血清购自杭州四季青公司；胰蛋白酶购自美国 GibCO公司：碘化丙啶(PI)、噻唑蓝(MTI")和DMSO 购自美国Sigma公司：caspase．3和caspase．8一抗和免 疫组化S-P试剂盒购自北京武汉博士德公司。流式细 胞仪为美国Coulter公司生产，全自动酶标仪为美国 Bio．TEK产品。

 1．3 MTI’法检测细胞的生长抑制率取对数生长期 细胞，将细胞浓度调至0．5×10 ／mL，每孔100 L接种 于96孔板培养24 h，然后加入不同浓度的干预因素 (即阳性对照2．5 mg／L AE组、5 mg／L AE组、10 mg／L 芦荟大黄素组)，阴性对照组加入0．1％DMSO，空白对照组加 入含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基，每组各设3 个复孔。继续培养24、48和72 h后，弃培养液，用 PBS漂洗1次。加入5 mg／mL的MTT 20 L培养6 h，吸弃孔内培养液，每孔加DMSO 100 L，使结晶充 分溶解．全自动酶标仪测其吸光度，波长570 Hm。细 胞生长抑制率=(1～处理组吸光度／对照组吸光度)100％ ，并以时间为横轴，以抑制率为纵轴绘制生长抑 制曲线。

 1．4 流式细胞仪检测细胞周期分布取对数生长期 细胞．将细胞浓度调至0．5×104／mL．培养24 h后加 入浓度为5 mg／L的AE继续培养24、48和72 h后收 集细胞，PBS洗2次，加胰酶200汕L室温孵育10 min，再加胰酶抑制剂和Rnase缓冲液200 L室温孵 育10 min，最后加PI染色液200汕L，4~C避光孵育15 min，流式细胞仪检测细胞周期(Go／G ，S，G：／M)。通过 CellQuest软件分析数据。

 1．5 免疫组化法检测细胞caspase．3和caspase．8 的表达 取对数生长期细胞，接种细胞数6×10s 个／孔，培养24 h后加入浓度为2．5、5、10 mg／mL 的AE继续培养48 h，用PBS液洗2遍。用95％ 乙 醇4~C固定细胞20 min，取出干后备用。按常规免疫 组化s，P法进行操作，苏木素复染。DAB显色。在每 张涂片上的左上、左下、中部、右上、右下随机选择 5个区域。计数阳性细胞和阴性细胞数。分别计算 阳性表达率。

 1．6 统计学分析应用SPSS 11．5软件。采用方差 分析进行统计分析。以P<0．05表示差异有统计学 意义。

 2 结果

 2．1 MrITr法检测AE对A549细胞的生长抑制作用 从图1可见：芦荟大黄素对A549细胞的生长抑制率随浓度 和作用时间的增加而呈明显上升趋势，表现出一定的 浓度一时间一效应依赖关系。

 2．2 流式细胞仪检测AE对A549细胞周期分布的影 响从表1可见：随着5 mg／L AE作用时间(24、48 和72 h)的延长，A549细胞的G0／，G，期细胞比率逐渐 下降，而G2／M期细胞比率逐渐上升。

 2．3 免疫组化法检测芦荟大黄素对A549细胞easpase．3和 easpase．8表达的影响从表2和图2、3可见：随着 AE的浓度(2．5、5、10 mg／mL)增加，A549细胞中 easpase．3和easpase．8的表达均上调(P<0．05)。