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| 芦荟大黄素、阿霉素联合应用对肝癌HepG2细胞增殖的影响 |
芦荟大黄素(aloe—emodin，AE)是从传统中药
芦荟、大黄等植物中提取的一种活性成分，属于蒽醌
类物质。近年来研究显示，芦荟大黄素具有抑制多
种肿瘤细胞增殖作用，因其低毒、活性强备受研究者
的广泛关注 卜引。肝癌是我国最常见并且严重威胁生命健康的恶性肿瘤之一。目前在肝癌化学治疗
中，细胞毒性药物作用有限，这也是肝癌化疗中的难
点。本研究将芦荟大黄素与阿霉素(ADM)联用，对
比芦荟大黄素、阿霉素单用和二者联用时对肝癌细
胞HepO2增殖的影响，为寻求新的肝癌治疗方法提供实验依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 药物试剂与仪器芦荟大黄素(delta天然
有机化合物信息中心)、阿霉素(深圳万乐有限公
司)；噻唑蓝(MTr)、DMSO、PBS、DMEM高糖细胞培
养基(美国Gibco公司)、胎牛血清(FBS，杭州四季
青生物工程公司)；Steri—cycle型二氧化碳培养箱
(美国Thermo Electron公司)、MR一96自动酶标仪
(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)。
1．1．2 细胞人肝癌细胞株HepG2，购自山东省医
学科学院。
1．2 方法
1．2．1 细胞培养肝癌细胞HepG2培养于含100
ml／L胎牛血清DMEM培养液中培养，37℃ 、5％CO
饱和湿度培养箱内培养。实验所用细胞均处于对数
生长期。
1．2．2 药物配制 分别将AE母液和ADM用含
10％胎牛血清DMEM高糖培养液稀释，其终浓度
AE分别为5 g／ml，lO g／ml，20 g／ml，4O g／m1，
8O g／ml；ADM分别为0．2 g／ml，0．4 ml，0．8
g／ml，1．6 g／ml。
1．2．3 实验分组设有空白对照组、实验对照组、
实验组(AE组、ADM组、AE+ADM组)。
1．2．4 药物抑制实验(M11'法) 把HepG2细胞
用0．25％ 胰蛋白酶消化，含100 ml／L胎牛血清的
DMEM细胞培养基重悬细胞，调整细胞浓度5×
10 ／L，每孔200 l接种于96孔板，置于CO2孵育
箱中培养24 h后，吸尽培养基，每孔依次加人100 l
上述浓度药液，联合用药组采用1：1方案，即每孔总
药量仍为100 l单药剂量浓度加倍各加5O l，两两
联合。每种剂量设6个复孔，培养48 h后加入M1Tr
溶液(O．1％)20 IXl，37 继续孵育4 h后终止培养，
弃上清，每孔加入100 l DMSO，摇床振荡10min，全
自动酶标仪490 nm测定各孔的吸光度值(A值)，按
公式计算细胞抑制率：细胞抑制率(IR)=1一用药
组A值／对照组A值×100％ ，并以每个实验组与实
验对照组比较，单独用药组与联合用药组分别比
较。
1．2．5 药物联合作用评价 采用两药相互作用
指数(coeficient of drug interaction，CDI)评价两药相
互作用，CDI按该公式计算：CDI=AB／(A×B)。根
据活细胞数(吸光值)进行计算，AB为两药联合组
与对照组吸光值的比值；A或B是各药物单独使用组与对照组吸光值的比值。当CDI<1时两药作用
性质为协同；当CDI<0．7时，协同作用非常显著；
CDI=l，则两药作用性质为相加；CDI>1，则两药作
用性质为拮抗。
1．3 统计学方法采用SPSS17．0软件包进行统计
学处理。单因素方差分析比较各组间差异，结果以
均数土标准差( ±s)表示，以P<0．05为差异有统
计学意义。
2 结果
2．1 AE、ADM单药对肝癌HepG2细胞株增殖的影
响AE终浓度为5、l0、2O、40、80 g／ml时作用于
肝癌HepG2细胞48h，抑制率分别为5．8％ 、
18．7％ 、32．1％ 、59．4％ 、90．6％ 。ADM 终浓度为
0．2、0．4、0．8、1．6 g／m l时作用于肝癌HepG2细胞
48 h，抑制率分别为18．3％、36．4％、63．7％、
85．1％ 。随着药物浓度的增加，AE、ADM单独作用
48 h对肝癌HepG2细胞的抑制率均相应增加，两药
均呈现明显的剂量效应关系。方差分析结果显示：
AE组(除5 g／m1)、ADM组与实验对照组之问均有
显著性差异(P<0．05)。(见表1、2)
2．2 AE与ADM联合应用对肝癌HepG2作用48 h
增殖的影响AE与ADM两药联用，较同剂量单独
用药组对肝癌HepG2细胞的抑制率均有不同程度
的增加。CD1分析显示：除AE+ADM浓度组(10
g／ml+1．6 Ixg／ml、20 g／ml+1．6 g／ml、40 g／ml+1．6 p．g／ml、80 p~g／ml+0．8~g／ml及80~g／ml+
1．6 g／m 1)为拮抗作用外，其他浓度联合组均为协
同作用，且有两浓度组(10~g／ml+0．8 lTll、20
p~g／ml+0．4 g／rn1)表现为协同作用显著。(见表
3)
3 讨论
肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，许多患者
确诊时已属中晚期，对于手术不能切除和其它一些
治疗方法无效或复发以及有远处转移的患者，化疗
起着重要的作用 J。阿霉素是抗肿瘤抗生素，是肝
癌单药化疗和联合化疗的常用药物，但其剂量累积
毒性(如心脏毒性)限制了其在临床的应用。
芦荟大黄素(aloe—emodin，AE)是从传统中药
芦荟、大黄等植物中提取的一种活性成分，属于蒽醌
类物质。研究表明芦荟大黄素能够抑制神经外胚层
肿瘤、肺癌、胃癌、肝癌等多种肿瘤细胞增殖，抗肿瘤
活性明显。综合国内外文献发现，研究芦荟大黄素
对肝癌作用以及芦荟大黄素与其他抗肿瘤药联合治
疗肝癌的报道少见。
我们通过以上实验发现芦荟大黄素对人肝癌
HepG2细胞的增殖抑制呈剂量效应关系，支持Kuo
等的研究结果 J。实验结果还显示芦荟大黄素和
阿霉素联合应用对人肝癌HepG2细胞的抑制率均
明显高于两药单独使用的抑制率，提示两药可能通
过作用于不同的受体对肿瘤细胞产生抑制作用，这
对进一步研究芦荟大黄素抗肿瘤作用机制提供了线
索。本实验通过计算两药联合应用相互作用系数，
发现两药有较好的协同作用。联合用药存在协同效
应，则可以通过适当增加药物的剂量以增强疗效而
将毒性反应控制在可以接受的范围之内，或在维持
原水平疗效的同时减低毒性药物的用量。因此，芦
荟大黄素与阿霉素联合应用可能是一种相对比较安
全的用药方案，从而为探索新的肝癌治疗方法提供
实验依据。但是两药联合抑制人肝癌HepG2细胞
增殖的机制尚不明确，有待进一步研究。
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