| 脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(dehydroandrogra． pholide succinate，DAS)的单钾盐及其钾钠盐具有抗 炎活性，对流感病毒、腺病毒及呼吸道合胞病毒也均 有一定灭活作用¨ 。以DAS的单钾盐及其钾钠盐 为原料制成的制剂分别有穿琥宁注射液和炎琥宁注 射液，临床上广泛使用，用于病毒性肺炎和病毒性上 呼吸道感染的治疗 。这2个品种质量控制所用的 对照品均为脱水穿心莲内酯(结构如图1所示)。而DAS本身 存在稳定性问题，在日常的贮存和使用过程中已经 显现出来，对穿琥宁注射液和炎琥宁注射液的质量 控制将产生直接影响。因此，本文对DAS的稳定性 进行研究，找出影响该品种稳定性的冈素，并采取相 应措施，保证该品种对照品使用的安全性以及相应 制剂质量控制的可靠性。
1 仪器与试药
美国Waters公司2695型高效液相色谱仪， 2996 PAD检测器，Empower pro色谱工作站，美国 Millipore公司Milli—QG超纯水制备仪。
脱水穿心莲内酯对照品(111598—200604)，由中国药品生物 制品检定所提供。所用试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。
2 方法与结果
2．1 色谱条件色谱柱：Phenomenex Cl8(250 mill ×4．6 mm，5 lem)，流动相：甲醇一1．5％ 醋酸溶液 (60：40)，流速：1．0 mL·min ，检测波长：251 nm， 柱温：室温，进样量：10 ILL。
2．2 线性关系考察精密称取DAS对照品适量， 用甲醇溶解并稀释成浓度为0．2，0．4，0．6，0．8， 1．0，1．5 mg·mL 的溶液，进样测定，记录峰面积。 以峰面积y为纵坐标，以进样量 (1eg)为横坐标回 归，得回归方程：
Y：1．13×10 X 一4．48 ×10 ，=0．9998
结果表明：DAS进样量在2～15 g范围内，和峰面 积呈良好的线性关系。
2．3 精密度精密称取脱水穿心莲内酯对照品适量，用甲醇 溶解并稀释成浓度为1．07 mg·mL 的溶液，精密 吸取10 ，注入液相色谱仪，连续进样6次，测得 DAS峰面积的RSD(／2=6)为0．3％ 。
2．4 DAS稳定性的影响因素考察
2．4．1 光照影响取脱水穿心莲内酯原料适量，置于光照箱 中，在(4500±500)1x下，放置10 d。此期间第0、第 5、第10 d，取样测定，与第0 d比较。结果表明：本 品在强光(4500±500)lx条件下，10 d内性状、含量 (平均含量为99．8％ ，RSD=0．15％ ，n：3)和有关 物质(平均含量为0．33％ ，RSD=1．7％ ，／2=3)基本 无变化，本品对光稳定。
2．4．2 氧化影响取脱水穿心莲内酯原料10 mg，精密称定， 置25 mL量瓶中，加适量甲醇溶解，加过氧化氢2 mL，加甲醇至刻度，混匀。分别在0，1，2，4，8，16 h取样测定。结果表明：含量(平均含量为99．6％)和 有关物质(平均含量为0．38％)均无显著性变化， RSD分别为0．36％和1．8％ ，本品对氧化稳定。
2．4．3 pH影响分别取脱水穿心莲内酯原料10 mg，精密称 定，加适量甲醇溶解，用1 mmol·L 盐酸和1 mmol · L。。氢氧化钠溶液调整pH分别为3，5，7，9，11，以 去离子水转移至25 mL量瓶中并调整至刻度，混匀， 室温放置6 h，取样测定。结果见表1。结果表明： 本品在强碱条件下，发生降解，不稳定。
2．4．4 温度影响分别考察DAS在溶液和固体状 态下对温度的稳定性。
DAS溶液样品的制备：取DAS原料10 mg，加甲 醇2 mL使溶解，加水至25 mL，分别取2 mL封于安 瓿中，即得。
DAS固体样品的制备：取脱水穿心莲内酯原料适量，封于 安瓿中，即得。
取上述2种样品分别置于40，60，80，100，120 ℃的恒温干燥箱中恒温保持4 h，取样，冷却，测定。 结果见表2，色谱图见图2。
从结果可以看出，脱水穿心莲内酯无论在溶液状态还是在 固体状态，对温度均不稳定，且降解行为不同。溶液 状态下的降解，有关物质含量随温度的升高而增加。 固体状态下的降解有关物质变化不明显。
进一步对溶液状态下的降解产物进行HPLC— MS(色谱条件同“2．1”项，质谱参数：毛细管电压为 3．5 kV，干燥气流速8 L·rain～，正离子方式检测) 分析，结果表明：2个主要降解产物的准分子离子峰 [M+Na] 的m／z均为455(见图3)，说明2个降 解物分别是由DAS水解脱掉不同的琥珀酸而形成。 固体状态下的分解未见明显的降解物，推测脱水穿心莲内酯的 母核遭到了破坏，现有uV检测方法检测不到。
根据对照品使用情况，本文对DAS固体降解的 化学动力学情况进行了分析，采用经典恒温法 分 析不同温度、不同放置时间DAS的含量变化情况。 利用Arrhennius公式计算出含量C(％)、时间t和 温度r之间的关系式为：
由此推测，25℃(298 K)条件下，1个月降解约 1％ 。说明本品常温情况下降解很快
3 讨论
通过不同影响因素的考察，发现脱水穿心莲内酯对光照、 pH、氧化条件都比较稳定，只是对温度不稳定。且 在固体情况下，降解产物紫外响应灵敏度很低，此种 情况给该品种的标化带来了一定的困难，后经研究 发现使用ELSD检测器也不能检测到降解产物，只 有在HPLC—MS的条件下才能检测到降解产物，该 方法已用于DAS的纯度监测。目前，有关标化的研 究_T作已基本完成，待后续报道。
经典恒温法用于推测药物的热降解规律存在一 定的误差，具体的稳定性情况还有待于进一步的留 样观察。
通过实验发现脱水穿心莲内酯对温度不稳定，无论固态还 是液态都会发生降解。所以，本品应低温保存。目 前，该品种保存在一l0℃ 冰箱中，经定期抽查证明 该条件下DAS稳定性很好。本项研究解决了DAS 的贮存和使用问题，同时也提示相应的制剂亦应低 温保存。 |
