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| HPLC法测定清火栀麦口服液中脱水穿心莲内酯和栀子苷含量 |
清火栀麦口服液处方源于中国药典(2005版)
清火栀麦片，由穿心莲、栀子和麦冬组成，方中穿心
莲清热解毒，凉血消肿，栀子泻火除烦，清肝明目，
麦冬养阴生津，润肺清心，三药合用共奏清热解毒，
凉血消肿之功效，主要用于肺胃热盛所致的咽喉肿
痛、发热、牙痛、目赤等症 。为了能有效地控制口
服液的质量，本试验采用高效液相色谱法对其主要
成分脱水穿心莲内酯和栀子苷的含量进行了测定。
实验材料
1．实验仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪、
DAD检测器、四元泵、Agilent 1100工作站；Bp211D电子分析天平(德国，sartorius)，FA1004 Maxl00g型
电子天平(上海精科天平有限公司)，AS10200A型
超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DZ一2BC
型真空干燥箱(天津市康司特仪器有限公司)。
2．实验试剂：甲醇、乙腈(均为色谱纯，天津市
天吴化工有限公司)，甲醇(分析纯，天津市化学试
剂批发公司)，脱水穿心莲内酯对照品(中国药品生
物制品检定所，批号：0854—200204)，栀子苷对照
品(中国药品生物制品检定所，批号：110749—
200511)，栀子、麦冬(天津市红桥区敬一堂药店)，
穿心莲(安国市昌达中药材饮片有限公司)，清火栀
麦口服液样品(自制)。
方法与结果
1．色谱条件：脱水穿心莲内酯的色谱条件：色谱柱：依利特C18(4．6 I／llTI×200 1Tln，5 m)，流动相：甲
醇一水(55：45)，检测波长：250 nm；栀子苷的色谱条
件：流动相：乙腈一水(13：87)，检测波长：238 nm。
2．标准曲线的制定：精密称取脱水穿心莲内酯
对照品适量，用甲醇溶解定容配成浓度为0．12 mg
。mL 的脱水穿心莲内酯对照品溶液，用0．45 m
的微孔滤膜过滤后，分别抽取2、4、6、8、10 L进样，
测定峰面积Y(见图i)。建立峰面积Y关于脱水穿
心莲内酯量 的回归方程：Y=1 356．5x+10．199
(r=0．999 9)，线性范围为0．24～1．20；xg；精密称
取栀子苷对照品适量，用甲醇溶解定容配成浓度为
0．42 mg·mL 的栀子苷对照品溶液，用0．45 m
的微孔滤膜过滤后，分别抽取4、6、8、l0、12、14、l6
进样，测定峰面积Y(见图5)。建立峰面积Y关
于栀子苷量 的回归方程：Y=769．25x一4．205 4(r
： 0．999 9)，线性范围为1．68—6．72 Ixg。
3．口服液样品测试液的制备：精密吸取清火栀
麦口服液8 mL至蒸发皿中，真空干燥(60~E)后，置
具塞锥形瓶中，加20 mL甲醇超声30 min，转移至
25 mL容量瓶中甲醇定容，取上清液，用0．45 m微
孔滤膜过滤即得。
4．精密度试验：分别精密吸取脱水穿心莲内酯
对照品溶液和栀子苷对照品溶液10 进样测定，
并各重复5次，计算脱水穿心莲内酯和栀子苷峰面
积值的RSD分别为0．88％和0．50％。
5．稳定性试验：取某一批口服液样品测试液，分
别按两种不同的色谱条件在0，1，2，4，8 h不同时间
间隔进样10 测定，结果脱水穿心莲内酯和栀子
苷峰面积的RSD分别为1．87％ 和1．48％ 。表明脱
水穿心莲内酯和栀子苷在12 h内稳定。
6．阴性对照试验：分别取不含穿心莲药材和不
含栀子药材的两阴性对照测试液10 进样测定。
其色谱在脱水穿心莲内酯和栀子苷的相应保留时
间内均无峰出现(见图2，6)，说明处方中其他成分
对测定结果无干扰。
7．穿心莲和栀子药材实验：精密称取穿心莲和
栀子药材粉末1．7 g和0．5 g，分别置具塞锥形瓶
中，各加入甲醇20 mL，浸泡1 h，超声处理(功率250
w、频率33 kHz)30 min，移至25 mL容量瓶中定容，
摇匀，静置，取上清液，用0．45 m微孔滤膜过滤分
别得穿心莲和栀子药材测定液，各取10 L进样，测
得峰面积(见图3，7)，经计算得脱水穿心莲内酯和
栀子苷含量分别为0．86％和1．83％。根据《中国药
典》20o5版一部穿心莲项下规定，脱水穿心莲内酯
和穿心莲内酯的含量总量不得低于0．8％ ，栀子项
下规定，栀子苷的含量总量不得低于1．8％ ，本实验
中穿心莲药材中的脱水穿心莲内酯含量和栀子药
材中的栀子苷含量均符合药典规定。
8．重复性试验：取第3批口服液样品6份，按口
服液样品测试液的制备方法制备测试液。进样10
L测定，结果脱水穿心莲内酯和栀子苷含量的RSD
分别为0．96％ 和1．61％ 。
9．加样回收率试验：精密吸取已知脱水穿心莲
内酯含量的15I服液样品0．5 mL(n=6)，分别精密加
入浓度为0．13 mg·mL 的脱水穿心莲内酯对照品
溶液0．2 mL，按口服液样品测试液制备的方法制备
测试液，10 L进样测定，结果见表1。同法精密吸
取已知栀子苷含量的口服液样品0．5 mL(n=6)，各
精密加入浓度为0．3l8 mg·mL 的栀子苷对照品
溶液0．4 mL，按口服液样品测试液制备的方法制备测试液，l0 L进样测定，结果见表2。
10．样品测定：取4批口服液样品，每批取3份，
按M服液样品测试液制备方法制备测试液，10 L
进样测得脱水穿心莲内酯和栀子苷峰面积(见图4，
8)，计算脱水穿心莲内酯和栀子苷含量，结果见表
3、表4。
讨 论
清火栀麦口服液为复方制剂，方中干扰成分多。
在用HPLC法测定其中的脱水穿心莲内酯和栀子苷
含量时，参考《中国药典》(2005版)的方法分别以
甲醇一水(55：45)，乙腈一水(85：15)为流动相，结
果脱水穿心莲内酯色谱峰分离效果良好，杂质干扰
较小，脱水穿心莲内酯峰的保留时间约为10 min左
右。而栀子苷色谱峰的分离效果不理想，后采用乙
腈一水(87：13)为流动相，柱温由25c【=变为30℃
时，所测成分在其保留时间内达到完全分离，峰型
较好。栀子苷峰的保留时间约为6．5 rain左右。
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