目的：分离并鉴定爵床科植物穿心莲Androgra phispaniculata地上部分85％乙醇提取物的二萜内酯类化学成分。方法：采用硅胶柱色谱法、凝胶柱色谱法、反相ODS柱色谱法以及反相高效液相色谱法进行分离纯化，并根据理化常数和光谱分析进行结构鉴定。结果：分离得到了14个化合物，分别为穿心莲新苷（neoandrographolide，1），3，14-二去氧穿心莲内酯（3，14-di—deoxyandrographolide，2），穿心莲内酯（andrographolide，3），14．去氧-11，12-二去氢穿心莲内酯（14-deoxy-11，12-didehydroandrographolide，4），19-hydroxy-8（17），13-labdadien-15，16-olide（5），14-去氧穿心莲内酯（14-deoxy-andrographolide，6），3-oxo-14-deoxy-andrographolide（7），异穿心莲内酯（isoandrographolide，8），双穿心莲内酯（bisandmgmpholide，9，10，11），去氧穿心莲内酯苷（deoxyandmgraphiside，12），14．去氧-11，12-二去氢穿心莲内酯苷（14-deoxy-11，12-didehydroandrographiside，13），穿心莲内酯苷（andrographiside，14）。结论：化合物7为新的天然产物，化合物5为从该属植物中首次分得。

 关键词:穿心莲 二萜内酯 化学成分

 Studies on diterpenoids from Andrographis paniculata

 Abstract:Objective： To study the diterpenoids in the 85% ethanol extract of the aerial parts of Andrographis paniculata. Method： Fourteen diterpenoids from the 85% EtOH extract were isolated by the silica gel, Sephadex LH -20, ODS column chromatography and HPLC, and their structures were identified by the spectal analyses and chemical evidences. Result： The 14 compounds were obtained and identified as neoandrographolide （ 1）, 3, 14-di-deoxyandrographolide （2）, andrographolide （3）, 14-deoxy-ll, 12-dide- hydroandrographolide （4）, 19-hydroxy-8 （17）, 13-1abdadien-15, 16-olide （5）, 14-deoxy-andrographolide （6）, 3-oxo-14-deoxy-an- drographolide （7）, isoandrographolide, （8）, bisandrographolide （ 9, 10,11）, deoxyandrographiside （ 12）, 14-deoxy-11, 12-dide- hydroandrographiside （13）, andrographiside （14）, respectively. Conclusion： Compound 7 was a new natural product, and compound 5 was obtained for the first time from the Andrographis species.

 Key words:Andrographis paniculata ; diterpenoids ; chemical constituents

 穿心莲为爵床科植物穿心莲属植物穿心莲An． drographispaniculata(Burro．f．)Nees．的干燥地上部 分。功能清热解毒，凉血，消肿。用于感冒发热，咽喉 肿痛，口舌生疮，泄泻痢疾，热淋涩痛，痈肿疮痛，毒蛇 咬伤。近年来国内外对穿心莲的研究很多，从中分离 得到了一系列二萜内酯类成分和黄酮类成分¨4。。作 者从地上部分85％乙醇提取物中分离得到14个二萜 内酯类化合物，分别鉴定为穿心莲新苷(neoandrogra． pholide，1)，3，l4-二去氧穿心莲内酯(3，l4一di-deoxyandrographolide， 2)，穿心莲内酯(andrographolide， 3)，14-去氧-11，12-二去氢穿心莲内酯(14-deoxy-11， 12-didehydroandrographolide，4)，19-hydroxy-8(17)，13- labdadien-15，16-olide(5)，14-去氧穿心莲内酯(14-deoxy- andrographolide，6)，3-oxo-14-deoxy-andrographolide( 7)，异穿心莲内酯(isoandrographolide，8)，双穿心 莲内酯(bisandrographolide，9，10，11)，去氧穿心莲内酯苷(deoxyandrographiside，12)，14-去氧-1 1，12-二去 氢穿心莲内酯苷(14-deoxy-11，12．didehydroandrogra． phiside，13)，穿心莲内酯苷(andrographiside，14)，具 体结构见图1。其中，化合物7为新的天然产物，化合 物5为从该属植物中首次分得。

 1 仪器与材料

 Yanaco显微熔点测定仪(未校正)；旋光用Jas． co P一1020型全自动旋光仪，在甲醇中测定；Bruker esquire 2000离子阱质谱测定仪；Bruker ARX 300和 Bruker Avance 400型核磁共振仪(TMS为内标物)； Waters 600(Waters，USA)高效液相色谱仪，检测器 PDA996，Millennium 32色谱工作站；Intersil Prep— ODS(20 mm x250 mm，5 I．zm)，GL sciences Inc制备 型反相色谱柱；Intersil Prep — C 一8(20 mm x250 mm，5 I．zm)，GL sciences Inc制备型反相色 谱柱；薄层色谱用硅胶G及GF254(青岛海洋化工 厂)；反相C 8板(Merk公司)；SephadexTM LH一20 (Pharmaeia公司)，ODS(Pharmacia公司)，色谱甲醇 (江苏汉邦高科技有限公司)，化学试剂均为分析纯 (沈阳化学试剂厂)。植物材料为穿心莲的地上部 分(福建产)，经本校孙启时教授鉴定。

 2 提取分离

 穿心莲地上部分l0 kg切成小段后，用85％ 的 乙醇加热回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压 回收溶剂，浓缩至小体积，用5 L水混悬，依次用环 己烷，醋酸乙酯萃取，取醋酸乙酯层295 g经硅胶柱 色谱，氯仿-甲醇溶剂梯度洗脱，分为8个部分。将 这8个组分分别用Sephadex LH一20，氯仿．甲醇 (1：1)洗脱，除去叶绿素。然后，组分I再次经硅胶柱色谱，用环己烷．醋酸乙酯梯度洗脱，经ODS开放 柱色谱及HPLC等从中分离得到化合物2(256．1 mg)，5(32．8 mg)，7(17．5 mg)。组分Ⅱ再次经硅 胶柱色谱，用环己烷．醋酸乙酯梯度洗脱，经ODS开 放柱色谱及HPLC等得到化合物4(34．2 mg)，6 (102．3 mg)。组分Ⅲ，Ⅳ 和并后再次经硅胶柱色 谱，用环己烷．丙酮梯度洗脱，经ODS开放柱色谱及 HPLC等得到化合物9(32．7 mg)，1O(67．5 mg)。 组分V再次经硅胶柱色谱，用环己烷-丙酮梯度洗 脱，经ODS开放柱色谱及HPLC等得到化合物1l (43．7 mg)。组分Ⅵ用甲醇重结晶得到化合物3 (56 g)，结晶母液再次经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇 梯度洗脱，得到化合物8(23．6 mg)。组分Ⅶ析出 无色针状结晶，经重结晶得到化合物l(23 g)。组 分Ⅷ再次经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇梯度洗脱，经 ODS开放柱色谱及HPLC等得到化合物12(47．7 mg)，13(35．5 mg)，14(83．5 mg)。

 3 结构鉴定

 化合物1 无色针状结晶(MeOH)，mp 201～ 203 cC(MeOH)；[Ot] 一40．0。(c 1．11，MeOH)； Kedde试剂反应阳性；UV(MeOH)nm：220；IR(KBr) em～：3 446，1 749，891。其理化常数及光谱数据与 文献[1]报道一致，故鉴定该化合物为穿心莲新苷。

 化合物2 无色针状结晶(MeOH)，mp 231 cC (MeOH)；[Ot] 一76．0。(c 1．11，MeOH)，Kedde试 剂反应阳性；UV(MeOH)nm：205；IR(KBr)em～： 3 287，1 745，1 648，895。其理化常数及光谱数据与 文献[3]报道一致，故鉴定该化合物为3，14-二去氧 穿心莲内酯。

 化合物3 无色片状结晶(MeOH)，mp 239 cC (MeOH)，[ ]2。0—112．7。(c 0．53，MeOH)；Kedde试 剂反应阳性；UV(MeOH)nm：223；IR(KBr)em～： 3 414，1 727，1 673，905。其理化常数及光谱数据与 文献[1]报道一致，故鉴定该化合物为穿心莲内酯。

 化合物4 无色针状结晶(MeOH)，mp 203～ 204 cC(MeOH)，[Ot +5．4。(c 1．02，MeOH)； Kedde试剂反应阳性；UV(MeOH)nm：250；IR(KBr) em～：3 422，1 741，883。其理化常数及光谱数据与 文献[1]报道一致，故鉴定该化合物为14．去氧．11， 12-二去氢穿心莲内酯。

 化合物5 无色针状结晶(MeOH)，mp 153～ 154 cC(MeOH)，[Ot] 一53．2。(c 0．21，MeOH)；UV(MeOH)nm：207；Kedde试剂反应阳性，提示该化合 物结构中含有五元Ot， ．不饱和内酯环。IR中显示 该结构中含有：羟基(3 492 em )，ot， -不饱和内酯 环(1 731，1 647 em )，环外亚甲基(899 em )的 特征峰；ESI．MS(positive)m／z：319[M+H] ，ESIMS( negative)m／z：317[M—H]一，提示该化合物的 相对分子质量为318。结合 H-NMR和 C-NMR确 定分子式为c 。H 。0：。该化合物的 H-NMR和 c- NMR谱与化合物2很相似，具有相同的ent-labdane 的双环骨架结构，但该化合物的五元不饱和内酯部 分与化合物2却有很大的不同。其中，c-13的化学 位移向低场位移6 38至6 172．1处，C-14的化学位 移向高场位移8 30．4至8 114．9处。该化合物和甲 型强心苷的五元不饱和内酯环的碳谱数据 相类 似，推测e胁．1abdane的双环结构应连接在五元不饱 和内酯环羰基的 位，而不是Ot位。在HMBC谱 中，16位连氧亚甲基的氢信号8 4．78(2H，t，J=1．6 Hz)与12位的碳信号8 27．6有 ．，相关，而在化合物 2中却观察不到连氧亚甲基的氢信号与的相关12 位的碳信号的相关，这也证实了以上的推测。最终 确定化合物的结构，与文献[6，7]报道的化合物19- hydroxy．8(17)，13．1abdadien．15，16一olide一致。该化 合物为本属首次分离得到。 H-NMR(400 MHz，pyridine． d )8：6．03(1 H，t，J=1．6 Hz，H．14)，4．78(2H， t，J=1．6 Hz，H．16)，4．52(1H，S，H．17a)，4．90(1H， S，H．17b)，1．20(3H，S，18-CH )，3．61(1H，dd，J= 10．6，3．7 Hz，H．19a)，3．98(1H，dd，J=10．6，3．7 Hz，H．19b)，0．72(3H，s，20．CH )。”C-NMR(100 MHz，pyridine-d )8：39．1(C-1)，19．4(C-2)，35．9 (C．3)，39．4(C4)，56．1(C-5)，24．7(C-6)，38．7(C- 7)，148．2(C．8)，56．6(C．9)，39．9(C-10)，21．6(C- 11)，27．6(C．12)，172．1(C．13)，114．9(C-14)， 174．3(C．15)，73．3(C．16)，106．7(C．17)，28．0(C- 18)，63．8(C-19)，15．3(C-20)。

 化合物6 无色片状结晶(MeOH)，mp 176—177 。c(MeOH)；[ ]∞D一30．7。(c 0．95，MeOH)；Kedde试剂 反应阳性；UV(MeOH)nm：200；IR(KBr)em～：3 280， 1 753，905。其理化常数及光谱数据与文献[1]报道一 致，故鉴定该化合物为14．去氧穿心莲内酯。

 化合物7 无色针状结晶(MeOH)，mp 127—128 cC(MeOH)．[ ] 一8．2。(c 0．36，MeOH)；uV(MeOH) nm：220；Kedde试剂反应阳性，提示该化合物结构中含有 ,／3-不饱和内酯环结构。IR中显示该结构中含有： 羟基(3 470 cm )， ， -不饱和内酯环(1 743，1 701 cm )，环外亚甲基(899 cm )的特征峰；ESI．MS(posi． tire)m／z：333[M+H] ，ESI．MS(negative)m／z：331[M — H]一，提示该化合物的相对分子质量为332。结 合 H-NMR和”C-NMR确定分子式为C20H勰O 。比较 该化合物与6的。H．NMR和”C．NMR发现，二者的主要 差别在于C-3，该化合物的C-3位为一羰基(”C．NMR：8 213．9)，而化合物6中的C-3位为一连氧次甲基(”c． NMR 8：79．9； H-NMR 8：3．63)。在该化合物的HM． Bc谱中，H-1，H-2，H-5，H-18，H．19的氢信号均与8 213．9的碳信号有相关，可以进一步确证羰基基团位于 C-3位。通过HSQC和HMBC谱可以最终确定其结构。 与文献[8]报道的化学合成产物3-oxo．14．deoxy．an． drographolide的结构一致，该化合物为一个新的天然产 物。 H-NMR(400 MHz，pyridine-ds)8：7．19(1H，t，J= 1．5 Hz，H一14)，4．74(2H，d，J=1．5 Hz，H-15)，4．98(1H， br S，H-17a)，4．81(1H，br S，H．17b)，1．42(3H，S，18． CH3)，4．27(1H，d，J：10．8 Hz，H．19a)，3．77(1H，d，J= 10．8 Hz，H-19b)，0．97(3H，S，20．CH )。 C．NMR(100 MHz，pyridine-ds)8：38．4(C-1)，36．3(C-2)，213．9(C- 3)，54．9(C4)，57．0(C-5)，25．3(C-6)，38．3(C-7)， 147．4(C-8)，55．7(C-9)，39．5(C．10)，22．6(C．11)，24．9 (C-12)，133．9(C-13)，145．5(C．14)，70．6(C．15)，174．6 (C-16)，108．0(C-17)，21．2(C-18)，65．3(C．19)，14．8 (C-20)。

 化合物8 无色片状结晶(MeOH)，mp 209～ 211 cc(MeOH)；[ ] 一47．2。(C 0．55，MeOH)； Kedde试剂反应阳性；UV(MeOH)nm：220；IR(KBr) cm～：3 398，1 727，1 673，905。其理化常数及光谱 数据与文献[1]报道一致，故鉴定该化合物为异穿心莲内酯。

 化合物9 白色无定形粉末(MeOH)，[ ]20— 74．5。(C 1．14，MeOH)；Kedde试剂反应阳性；UV (MeOH)nm：207，258；IR(KBr)cm～：3 411，1 732， 1 647，895。其理化常数及光谱数据与文献[1]报道 一致，故鉴定该化合物为双穿心莲内酯A。

 化合物l0 淡黄色无定形粉末(MeOH)，[ ] +1．6。(C 1．02，MeOH)；Kedde试剂反应阳性；UV (MeOH)nm：214，259；IR(KBr)cm～：3 421，1 713， 1 651，905。其理化常数及光谱数据与文献[1]报道 一致，故鉴定该化合物为双穿心莲内酯B。

 化合物ll 淡黄色无定形粉末(MeOH)，[ ]2 0 — 8．9。(C 0．47，MeOH)；Kedde试剂反应阳性；UV (Me0H)nm：212，258；IR(KBr)cm～：3 422，1 723， 1 678，913。其理化常数及光谱数据与文献[1]报道 一致，故鉴定该化合物为双穿心莲内酯c。

 化合物12 无色片状结晶(MeOH)，mp 200～ 202℃(MeOH)；[ ]2D2—38．5。(C 0．33，MeOH)；Kedde 试剂反应阳性；UV(MeOH)nm：220；IR(KBr)cm～： 3 384，1 747，898。其理化常数及光谱数据与文献[1] 报道一致，故鉴定该化合物为去氧穿心莲内酯苷。

 图1 从穿心莲中分离得到的化合物1—14的结构

 化合物13 白色无定形粉末(MeOH)，[ ] +18．0。(C 0．23，MeOH)；Kedde试剂反应阳性；UV(MeOH)nm：251；IR(KBr)cm～：3 424，1 749，891。其理化常数及光谱数据与文献[9]报道一致，故鉴定该化合物为14．去氧．11，12一二去氢穿心莲内酯苷。

 化合物14 无色片状结晶(MeOH)，mp 201～ 203℃(MeOH)；[ ]2D0—87．9。(C 1．01，MeOH)；Kedde 试剂反应阳性；uV(MeOH)am：223；IR(KBr)cm～： 3 406，1 727，l 674，889。其理化常数及光谱数据与文 献[1]报道一致，故鉴定该化合物为穿心莲内酯苷。