1 仪器与材料

 1．1 仪器

 Bruker Advance 400核磁共振仪(德国Bruker公司)； AVATAR360付立叶变换红外光谱仪(美国Nicolet公司)； 三乐微波炉WP750—1型(中国南京三乐电气总公司)； UV1600紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)； 电子天平AG135(METTLER TOLED0)。

 1．2 药品与试剂

14-去氧穿心莲内酯(河南大学天然药物研究所天然药物分子设计室提 供)，归一化法(HPLC)测定纯度>99．oH；G—CD (孟州 市华兴生物化工有限责任公司)，纯度为99．3 ；无水乙醇：色谱纯(天津科密欧化学试剂有限公司)；水为二次蒸 馏水。

 2 方法及结果

 2．1 包合物的制备

 称取14-去氧穿心莲内酯 0．034 1 g(O．102 1 mmo1)及13-CD 0．226 0 g (O．199 1 retoo1)置入100 mL锥形瓶中，加入6 mL蒸馏水 及乙醇，置于微波炉中，中档(375 W)加热90 S，取出， 放冷后，产物于冰箱0℃保鲜层中放置12 h。抽滤，滤饼用 适量的蒸馏水洗涤，50。C干燥12 h，压碎后，干燥物用适 量无水乙醇洗涤，5O℃干燥2 h，即得包合物。

 2．2 物理混合物的制备

 称取14-去氧穿心莲内酯 0．076 4 g(0．228 7 mmo1)及13-CD 0．236 2 g (0．208 1 retoo1)，均匀混合得物理混合物。

 2．3 包合常数的测定—— 紫外分光光度法

 2．3．1 测定波长选择用pH 6．86的缓冲液配制成4．21× 10眦5mol·I _1的DA溶液，进行全波扫描，选择合适的波 长范围，作为测定波长。

 2．3．2 14-去氧穿心莲内酯溶液的配制再用pH=6．86缓冲液配制DA的 过饱和溶液，0．45／,m微孔滤膜过滤，弃去初滤液，续滤液 用于测定Ka。

 2．3．3 13-CD溶液的配制取0．131 2 g 13-CD置于1O mL容 量瓶中，加入适量的pH=6．86缓冲液，超声溶解，缓冲液定容后，得0．011 6 tool·L 的 CD溶液。

 2．3．4 测定方法取一定量14-去氧穿心莲内酯过饱和溶液于比色皿中， 于所选波长范围内紫外扫描得特定波长下的紫外吸收值，依 次向体系中加入不同量的0．011 6 tool·L CD溶液后进 行紫外扫描，得到不同 CD浓度体系的紫外吸收。据文 献_5]的2个公式计算Ka值：

 1／~A= (1／eKa[G]。)(1／[CD]。)+l／e[G]o (1) ZXA一一(1／Ka)(ZXA／[cD]。)+As[G3。 (2)

 由公式(1)的斜率和截矩及(2)的斜率可计算得包合 常数Ka。

 2．3．5 包合常数的测定14-去氧穿心莲内酯分子在200 nlTl附近有一最大 吸收，当体系中存在高浓度的 CD时，DA紫外吸收随着 CD浓度的增加而明显增强，而且两者成明显的正比关系。 由此可见， CD与DA发生了包合。

 由公式(1)得曲线方程为y一0．006 31 X+8．156 55 ( 一O．997 43)，求得Ka一1 292．631 tool·L 。

 由公式(2)得曲线方程为y一一0．000 76 X+0．121 89 ( 一O．988 39)，求得Ka=1 315．789 tool·L 。

 本实验利用紫外法的2个公式都获得了良好的线性关 系，但求得的Ka值有一些差距，原因可能有：公式(1) 的推导中简化了许多的影响因素如 cD的吸收等，易获得 较好线性关系，公式(2)考虑到A= Dr-c+AcD+AG等 的情况，较方程(1)更接近实际也更严格，并且对实验操 作要求更高，较难获得良好的线性关系，所以求得的Ka值 较准确。

 包合常数是衡量包合水平的一个重要参数。当Ka值为 102~105 tool·L 时包合效果最好，太小不宜包合，太大 则脱包合困难。根据以上结果我们可初步判定，DA可以和 ~?-CD发生包合。

 方程(1)也叫Benesi—Hildebrand方程，文献报道 以 1／△A对1／[cD]o作图，如为一条直线，则表明客体分子 与CDs形成了1：1包合物，本试验结果与此相符，证实 DA与~?-CD形成了1：1的包合物。

 2．4 包合物的红外分光光度法确证

 2．4．1 实验方法KBr压片法分别测定14-去氧穿心莲内酯、fCD、物理 混合物和包合物的红外光谱。

 2．4．2 实验结果 由图1(A)知：由IR谱知：DA与 CD的物理混合物与包合物相比，DA的特征峰发生改变。 具体情况如下：在物理混合物中，DA的羰基(一c一())振 动和双键(一C—C 12，13)振动吸收峰分别在1 752．88、 1 646．61 ern_。、而包合物的相应峰分别移到了1 751．33、 1 637．06 ern ，向高波数方向移动，由此说明客体分子 (DA)的羰基一C=O和双键(一C=C 12，13)伸缩振动受到 了限制，14-去氧穿心莲内酯中的五元内酯环很可能插入到了G一环糊精的空 腔中。物理混合物中DA十氢萘环上的双键(一c—C 8，17) 的伸缩振动和弯曲振动的吸收峰分别在1 700．60、850．64 cm- ，包合物的伸缩振动峰被掩盖，其弯曲振动峰移到 859．99 cm- ，向低波数方向移动，说明也受到了环糊精的 影响，由以上事实综合证明了包合物的形成。

 2．5 包合物的氢核磁共振法确证

 2．5．1 实验方法DMSO-de作溶剂，分别测定14-去氧穿心莲内酯、~?-CD、 物理混合物和包合物的核磁共振谱。

 2．5．2 实验结果由图2知：包合物的结构也可以用核磁共 振氢谱推断。由于主客体之间的相互作用将导致核磁共振氢谱 出现特征性的化学位移变化。这些变化给出了包合方式的信息， 使得核磁共振在包合物的研究中有着特殊的作用。表1、2给出 了pCD与DA包合前后， H-NMR化学位移变化值。从表中可 以看出，形成包合物后， CD的质子都向高场发生了移动，而 14-去氧穿心莲内酯的质子大都向低场发生了较大的化学位移，但十氢萘环上 的18一H、3-OH、19-OH的化学位移分别向高场移动0．001 5、 0．000 1、0．049 9 ppm，由此说明萘环及其支链上面的氢原子受 到屏蔽这一事实证实了包合物的形成。

 3 讨论

 包合是一种物理过程，包合物形成主要取决于环糊精与 客体分子的立体结构及两者作用力的大小，所以在包合前， 首先应考虑客体分子的大小是否与环糊精的空腔内径相匹 配，这样客体分子才有进入环糊精空腔中的可能。主客体之 间的作用力有范德华力 ]、氢键作用力 ]、疏水力和库仑力 4种。在包合过程中，疏水力、范德华力起主要的作用，由 于疏水力是包合过程中的一个重要的推动力，所以包合一般 在水溶液或稀醇中进行。大多数有机溶剂不能使用，因它们 能与环糊精形成稳定的化合物，与客体分子竞争。

 由于14-去氧穿心莲内酯分子的骨架包含2部分：十氢萘环和五元内酯 环，且又都符合被包合的立体构型，故导致它与 cD作用 时，可能会产生2种1：1的包合产物或一种1：2的包合产 物，但是由以上的Benesi Hildebrandl_5]法测定包合比后发 现；DA与 CD形成的包合物为1：1包合物，推断可能为 2种1：1包合物，一种包合十氢萘环及其支链，另一种包 合五元内酯环，包合产物为包合十氢萘环和五元内酯环的两 种包合物的混合物；经计算机辅助软件CAChe 6．1计算， 14-去氧穿心莲内酯的五元内酯环和十氢萘环可以被包合。这也与实际的验 证结果相符。

 自2O纪初环糊精被分离得到以来，在医药方面得到了 广泛的应用。一些药物制成环糊精包合物后，溶解度、生物 利用度、化学稳定性、刺激性等方面都得到了明显的改善， 因此环糊精作为一种药物辅料在医药方面有着重要的应用价 值。本文采用微波辅助饱和水溶液法将DA做成包合物，可 提高其稳定性，增加了其水溶性，为14-去氧穿心莲内酯在医药方面的应用 奠定了基础。

 在包合物形成的鉴定方面，除红外分光光度法及核磁共 振法外、TCL检测『9]及热重分析『l。]的方法，也是比较简单、 快速的方法。更深入的研究中，将会使用多种方法，共同的 鉴定包合物的形成。