关键词:穿心莲胶囊 质量控制 穿心莲内酯 脱水穿心莲 内酯

 穿心莲胶囊为已有国家标准的中药成方制剂。现行穿 心莲胶囊质量标准为《卫生部药品标准》wS=I—B-3933-98，检 测项目包括性状、鉴别、含量测定、检查，其中含量测定采用 薄层扫描法测定脱水穿心莲内酯的含量。穿心莲主要有效 成分为穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、新穿 心莲内酯等二萜内酯类成分，其中脱水穿心莲内酯和穿心莲 内酯与穿心莲胶囊的功能与主治有较密切的关系口] 为了 更好地控制产品质量，本试验参考有关资料L “]，在穿心莲 胶囊的质量标准研究中将脱水穿心莲内酯的含量测定方法 由TLC扫描法改为高效液相色谱(HPLC)法 。]，并增加穿 心莲内酯的含量测定¨4]。

 1 材料

 高效液相色谱仪(美国Waters公司：Waters1505泵， Waters2487检测器Waters自动进样器，Empower色谱工作 站)；色谱柱：YMC Hydrosphere 8(250 nirnX 4．6 nirn，5 m)；穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所．批号 l10797—200307)；脱水穿心莲内酯对照品(中国药品生物制 品检定所，批号1108541—200306)；乙腈、甲醇均为色谱纯，水 为纯化水，其他试剂为分析纯；试验用样品及空白对照由广 州泽力医药科技有限公司试制(仅供本实验用)，样品批号 20040713，20()41010，20041012。

 2 方法

 2．1 色谱条件

 色谱柱：YMC Hydrosphere C】8柱(250 rain X4．6 iTlrn，5 m)；流动相：乙腈一水(二元梯度洗脱)；流速：1 mL·mim ；柱温：35℃ ；检测波长：254 rim；进样量：2O L。

 2．2 溶液的制备

 2．2．1 对照品溶液

 精密称取穿心莲内酯对照品22．80 mg、脱水穿心莲内酯对照品10．71 mg，加甲醇分别制成含穿 心莲内酯2．280 g·L。’和脱水穿心莲内酯1．071 g·L 的对照品储备液，取对照品储备液加甲醇分别制成含穿心莲内酯 0．228 0 g·I 和脱水穿心莲内酯0．107 1 g·I 的对照品溶 液。

 2．2．2 供试品溶液

 取穿心莲胶囊内容物0．5 g，精密称 定，置25 mI 量瓶中，加甲醇1()mI ，冷浸24 h，超声处理3() rain，用甲醇定容，摇匀，滤过即得。

 2．2．3 阴性对照溶液

 按《卫生部药品标准》W B-3933— 98“穿心莲胶囊”项下制备不含穿心莲的阴性样品，按供试品 制备方法制备，即得阴性对照溶液。

 2．3 系统适用性试验

 吸取对照品溶液、供试品溶液和阴 性对照液各2( I ，分别注人液相色谱仪，按上述色谱条件分 析即得，见色谱图1。

 图1 穿心莲胶囊高效液相色谱图

 A．穿心莲内酯对照品；H脱水穿心莲内酯对照品；C．穿心莲胶囊；I) 空白样品；1一穿心莲内酯；2-脱水穿心莲内酯

 Fig 1 HPLC chromatograms of chuanxinlian capsules A．andrographls panicuha lactone；13．dehydrated andrographis pani— culta lactone；C．chuanxinlian capsules；13．blanM 1一andrographis paniculta lactone；2-dehydrated andrographis panicuha lactone

 在上述色谱条件下，阴性对照液对穿心莲内酯和脱水穿 心莲内酯的测定无干扰。

 2．4 线性关系考察

 分别精密吸取穿心莲内酯、脱水穿心 莲内酯对照品储备液各0．1．3，5，7．10 mL，分别置20 ml 量 瓶中，用甲醇稀释并定容，配制成梯度浓度的溶液，分别吸取 2() I 注入液相色谱仪，按上述检测方法进样，以峰面积(y) 对浓度(X)作线性回归图，计算得回归方程。

 穿心莲内酯回归方程：Y=4．836 0x 10 X一1．788 4(r ：f)．999 9)

 脱水穿心莲内酯回归方程：Y=1．660 5 X 10 X一 4．771 6(r= 0．999 9)

 表1 穿心莲内酯回收率(， 5)

 Tab 1 The recovery of andrographis paniculta lactone f’?= 5)

 穿心莲内酯在22．8~228．0 mg·I 、脱水穿心莲内酯在 10．7～107．1 mg·L 范围内线性关系良好。

 2．5 加样回收率试验

 精密称取已知含量的同一批号 (20040713)穿心莲胶囊内容物，定量加人穿心莲内酯、脱水 穿心莲内酯对照品，按样品测定法进行测定，计算回收率平 均值。

 穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的加样回收率分别为 99．65％，RSD为1．38 。101．41％，RSD为1．70 。

 表2 脱水穿心莲内酯回收率( =5I

 Tab 2 The recovery of dehydrated andrographis lactone(”= 5)

 2．6 精密度及稳定性试验

 精密吸取同一供试品溶液2() I ，连续进样6次，计算峰面积RSD。结果显示穿心莲内酯 和脱水穿心莲内酯的峰面积RSD值分别为0．74 和 0．88 ，精密度良好。精密吸取同一供试品溶液2() L，分别 在0，1，2．4，6，12 h进样1次，计算12 h内峰面积的RSD值。 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的峰面积RSD值分别为 ()．27 和0．58％，说明样品供试液在12 h内稳定。

 2．7 样品的测定

 精密称取同一批号(2004()713)穿心莲胶 囊的内容物6份，按供试品制备方法制备供试品溶液，测定 穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯含量，计算其含量及RSD值。 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的峰面积RSD值分别为 2．78 和1．77 ，本方法重复性良好。

 2．8 样品的测定

 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液 各2() I ，依上述色谱条件测定含量，用外标法分别计算穿心 莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，结果见表3

 表3 样品含量测定结果(， =3)

 Tab 3 The results of sample determination( =3)

 2．9 与原薄层扫描法的比较

 取穿心莲胶囊内容物按药典 标准薄层扫描法和新建HPI C法检测，结果见表4。

 表4 薄层扫描法和HPI C法检测结果比较

 Tab 4 Comparison of TI C and HPI C restules

 结果显示新建HPI C法测定的两者含量均略高于TI C 法，含量结果总体一致。

 3 讨论

 3．1 HPLC色谱条件的选择

 参照文献。‘ ，通过研究试 验，初步比较不同C、 柱、不同洗脱系统的分离效果，根据对 表5中4个色谱条件下的试验结果进行综合比较表明，最佳 色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱： YMC Hydrosphere C 250 ITL~IX 4．6 ITL~I。5 m)，乙腈一水 (-元梯度洗脱)为流动相，流速为1 mL·min～，柱温为35 ℃ ；在波长选择上，根据DAD扫描结果，因254 nrn对乙腈梯 度洗脱程序的基线漂移影响较225 nm小，故选择254 nrn为 检测波长；理论塔板数按穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯计算，均不低于5 000。

 表5 色谱条件的选择

 Tab 5 Selection of chromatographic comditions

 3．2 供试品溶液制备方法选择

 3．2．1 提取溶媒的选择

 供试品溶液的制备采用甲醇或乙 醇提职 。试验发现乙醇提取较甲醇提取含量偏低；试验中 增加了对7()％乙醇提取效果的比较，结果其提取效率较甲 醇、乙醇高，因此确定提取溶媒为70％乙醇。

 3．2．2 提取方法选择

 按上述色谱条件分别测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果随着冷浸时间的增加，穿 心莲内酯的含量在()～2 h内增加幅度较大，2 h后增加不明 显，脱水穿心莲内酯含量在2 h后未见增加。考虑提取时间 因素，确定冷浸时间为2 h。

 本试验在确定冷浸时间为2 h的前提下，分别采用超声 处理1()，2O，3()，60 min的提取条件制备供试品溶液，按照上 述色谱条件分别测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。 结果超声处理时间有1()～60 min内，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含水量无明显变化，因此确定超声处理时间为1() m ln 。