1 金铁锁化学成分提取方法及现状

 浦湘渝等采用乙醇回流抽提金铁锁根粉3次，得到的乙 醇提取物溶于水中，用乙醚萃取3次，再用正丁醇萃取3次， 减压回收正丁醇萃取物，用硅胶柱进行分离，氯仿一甲醇一 水(65：35：8)洗脱，再用Lober Rp一8(Merck)柱分离纯化(洗脱 液：甲醇-水=7：3～8：2)。得到7种化合物，其中2种皂甙经 鉴定分别为：齐墩果烷一3仪，16a-二羟基一12-烯一23一酸一28-0一B- 葡萄糖吡喃糖基(1—3)-13-3一葡萄糖毗哺糖基(1—6)一B． D．葡萄糖吡喃糖甙la和齐墩果烷-3 ，16a．二羟基．12一烯．23- 酸-28-0．p—D一葡萄糖吡喃糖基(1—6)．p-D．葡萄糖吡喃糖基 (1— )．B-D一葡萄糖吡喃糖甙1b(图1)” 。

 丁中涛等用浓度90％ 乙醇回流提取金铁锁干燥根粉3 次，每次4 h，减压下旋干，得到的乙醇提取物经丙酮沉淀，硅胶 柱分离，洗脱液为CHC13-MeOH(19：1～7：3)，洗脱后TLC显示 有IV个组分，对组分Ⅱ通过硅胶柱和RP-HPLC分离得到2个 新的天然环二肽2a和2b(图2)以及2个新的环八肽 。

 钟惠民等用浓度9o％ 乙醇回流提取金铁锁根粉4次， 减压下旋干溶液，残留物溶于丙酮后经硅胶柱分离，CHCI 一 MeOH．H 0(8：2：0．2～65：35：8)洗脱，再用RP—C 8柱分离纯 化，得到5个齐墩果烷型五环三萜皂苷，分别为3a一3e 。 3a：3-0．B．D．半乳糖．(1-2)一B．D．吡喃葡萄糖醛酸基棉根皂 甙；3b：3-0．B—D．半乳糖．(1—2)一[p-D-吡喃木糖一(1-3)一吡喃 葡萄糖醛酸基棉根皂甙；3c：3-0·p-D·半乳糖-(1-2)-p—D-吡 喃葡萄糖醛酸基棉根皂甙元-28一O-B·D一吡喃木糖-(14)·[p- D．吡喃葡萄糖1．(1．3)]． ．L一吡喃鼠李糖基(1-2)一8-D．吡喃 岩藻糖甙；3d：3-O．p．D．半乳糖·(I-2)一[p-D-吡喃木糖-(1- 3)]-B．D一吡喃葡萄糖醛酸基棉根皂甙元-28-O一母-D-吡喃木 糖-(14)-[B-D-吡喃葡萄糖·(1-3)]-仅一L-吡喃鼠李糖(1_2)一 13-D-吡喃岩藻糖甙；3e：3-0-13-9一半乳糖-(1．2)-13-D-吡喃葡 萄糖醛酸基棉根皂甙元 28一O．p-D．吡喃木糖．(1-4)-[p．D-6． O-已酰葡萄糖．(1-3)]．a．L．吡喃鼠李糖(1—2)-B—D一吡喃岩藻 糖甙(图3) 。第2年该课题组采用同样的方法从金铁锁 根粉中得到4个齐墩果酸型五环三萜皂甙 ，分别为4a一4 d。4a：3-0．8一D．半乳糖 (1-2)一13-0-6-0．甲基吡喃葡萄糖醛 酸；4b：3-0一p-D．半乳糖．(1—2)-[p—D·吡喃木糖一(1—3)]-p— D一吡喃葡萄糖醛酸；4e：3-0一B-D-吡喃半乳糖-(1_2)．[13-3-吡喃木糖一(1·3)]-13-D-6—0一甲基吡喃葡萄糖醛酸；4d：3-0一B— D邛比喃半乳糖·(1-2)-[B·D-吡喃木糖-(1·3)]-13-D-6—0·乙 酰基吡喃葡萄糖醛酸(图4)。

 丁中涛等对金铁锁根中的环肽成分进行系列研究，得到 3个环二肽化合物5a～5c(图5)，其中化合物5a和5b为新 的天然产物，化合物5c为首次从金铁锁中得到。同时还分 离得到4个内酰胺化合物：d一吡咯烷酮、焦谷氨酸、焦谷氨酸 乙酯和焦谷氨酸丙酯。方法为：以浓度90％ 乙醇回流提取金 铁锁根粉3次，每次4 h。减压浓缩后，浸于丙酮溶液中，搅 溶，过滤得丙酮溶解部分，减压浓缩后所得浸膏进行硅胶柱 层析，以氯仿一甲醇(0：1～7：3)梯度洗脱，得FrI～Ⅳ共4个 组分。将FrlI再进行Diaion HP一20柱层析，以水一甲醇(1：0、 1：1、3：7、0：1)洗脱，收集浓度70％ 甲醇部分，然后将该部分 再进一步经硅胶柱层析(分别以氯仿一甲醇95：5，乙酸乙酯 一甲醇98：2洗脱)及Rp．18反相硅胶柱层析(水-甲醇1：9洗 脱)，分别得到化合物5a环(脯一缬)、5b环(脯一丙)和5c 环(脯一脯)” 。

 秦学玲等提取了金铁锁根中的3-0-6-0’一甲基一B—D·葡 萄糖醛酸丝石竹甙并测定其含量。方法为：用浓度80％ 乙醇 提取金铁锁根粉，提取物溶于水中，经大孔吸附树脂柱层析， 浓度80％乙醇洗脱，硅胶层析[氯仿一甲醇一水(10．0：2．0： 0．1～6．0：5．0：1．0)梯度洗脱]及RP-c 、RP—C 反相硅胶柱层 析，浓度30％ ～85％ 甲醇溶液梯度洗脱。通过HPLC、TLC检测，FAB—MS、 H NMR、”C NMR等方法对其结构进行鉴定，得 到3-0-6-O 一甲基一8-D一葡萄糖醛酸丝石竹苷。纯度为 98．8％ ，含量为3．75％ 。该法灵敏、准确可靠，制得的化合物 可作为衡量金铁锁提取物质量的依据 。

 秦学玲等对金铁锁根粉的提取工艺进行研究。以金铁 锁提取物提取率为主要考察指标，分别对大孔树脂吸附法、 正丁醇萃取法、丙酮沉淀法进行比较。其中大孑L树脂吸附提 取率为5．0％ ，正丁醇萃取提取率为3．5％ ，丙酮沉淀提取 率为2．4％ 。从生产成本上考虑，选择乙醇为提取溶剂，以 乙醇浓度、提取方法、提取时间作为考察因素，以金铁锁提取 物提取率为主要考察指标进行正交试验k(3 )。得到金铁 锁的最佳提取工艺为：用浓度80％ 乙醇浸渍金铁锁根粉3 次，每次48 h，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，加水溶解，水溶液 经DM．101型大孔吸附树脂柱层析，分别用浓度10％、20％及 80％ 的乙醇洗脱，收集浓度80％ 乙醇洗脱液，减压浓缩经喷 雾干燥得金铁锁提取物-- 。

 刘潇潇等为寻找金铁锁根中镇痛、抗炎的活性成分，对 根粉的化学成分进行了研究，分离得到7个化合物。方法 为：采用浓度90％ 乙醇回流提取金铁锁根粉3次，每次4 h， 所得浸膏加水搅拌，离心，弃去油层，水层经大孔树脂HPD一 100分离，乙醇梯度洗脱，得到浓度15％ 、75％ 、95％ 3段流 分，所得浓度75％ 乙醇部位浸膏用硅胶柱色谱分离(氯仿一 甲醇梯度洗脱)得5个流分(9：1、8：2、7：3、6：4、5：5)，将氯仿一 甲醇7：3流分经SephadexLH-20柱色谱(甲醇一水1：1洗 脱)，反复纯化得化合物6a(goyaprosaponin)；将氯仿一甲醇8 ：2流分通过硅胶柱色谱分离(氯仿一甲醇，100：1～100：50梯 度洗脱)，得化合物6b[大豆脑苷I(soyacerebroside I)]和6c [鸢尾苷(tectoridin)]；将离心后所得沉淀与浓度95％ 乙醇 部位合并，经硅胶柱色谱分离，氯仿一甲醇梯度洗脱得到8 个流分(100：2、100：5、9：1、8：2、7：3、6：4、5：5)，将氯仿一甲醇(9 ：1)流分反复纯化得到化合物6e(胡萝卜苷)；将氯仿一甲醇 100：2流分通过硅胶柱色谱分离(氯仿一甲醇100：0．5)，得到 化合物6g(正二十五烷酸)；将氯仿一甲醇100：5流分，进一 步通过硅胶柱色谱分离(石油醚一乙酸乙酯，100：5—1：1梯 度洗脱)，得到化合物6d[ -菠甾醇( ·spinastero1)]和6f(B一 谷甾醇) “]

 黄春青等采用多指标均匀设计法，考虑适应工业生产的 要求，选择水和乙醇作为提取溶媒，以溶媒含醇量、提取方 法、溶媒用量、提取时间、提取次数和溶媒pH值为考察因素， 所得各提取物的水浸出物、醋酸乙酯浸出物、乙醚浸出物及 其抗炎、镇痛和急性毒性试验结果为评价指标，用u (4。)均 匀表进行金铁锁的提取工艺优选，得到最佳提取工艺为：8倍 量pH值6～7的水回流提取2次，每次2 h。试验首次采用 综合药效学和浸出物指标对药材提取工艺条件进行优选。 试验结果表明，不同提取工艺条件所得金铁锁提取物均具有 极显著的抗炎作用，且各试验组间抗炎作用、镇痛作用和急 性毒性存在明显差异；所得最佳提取工艺条件结果令人满 意，重现性良好且适合工业生产；所测定的几种浸出物均不 宜作为与功能主治有关的质量控制指标 。

 2 金铁锁临床应用及药理研究现状

 金铁锁在临床上有广泛和重要的应用。目前临床上使 用的以金铁锁为主的药和含有金铁锁的药剂有治疗伤科的 “云南白药”和“百宝丹”；治疗风湿痹阻引起的肌肉酸痛、屈 伸不利、关节红肿疼痛等症的“金骨莲胶囊”，治疗效率达 93％ ；治疗出血、疼痛以及多种妇产科疾病的“痛血康胶囊”； 治疗由革兰氏阴性菌、阳性菌，厌氧菌引起的阴部感染的药 物“消灵”；治疗跌打损伤(软组织扭伤、挫伤等)和各种关节 痛的“雪上一枝蒿”速效止痛搽剂；治疗风湿痹痛、筋骨无力、 屈伸不利、步履艰难、腰膝疼痛、畏寒喜温等症的“杜仲壮骨 丸”和“杜仲壮骨胶囊”；治疗刀枪伤、跌打伤所致的疼痛，妇 女经痛及部分晚期恶性肿瘤疼痛等症的“一粒止痛丸”等。 目前金铁锁的临床应用越来越广泛，用于治跌打损伤、风湿 疼痛、胃痛、创伤出血、风湿性关节炎、腰腿痛、疮疖、蛔虫症、 慢性咳喘等都取得令人满意的效果。

 许建阳等报道了金铁锁水煎浸膏对试验性类风湿关节 痛(RA)的镇痛作用，并阐述其作用机制。试验结果表明，金 铁锁水煎浸膏能提高RA疼痛模型痛阈值，改善血液循环， 具有活血化瘀、止痛之功；具消除炎性肿胀、足肿胀度，提高 疼痛级别，改善功能障碍的作用。提示金铁锁水煎浸膏具有 明显的镇痛、抗炎、解热作用。同时提示金铁锁大、中剂量组 可明显降低血清中的一氧化氮／一氧化氮合酶(NO／NOS)， 其中金铁锁大剂量组镇痛作用与西药阳性对照组无明显差 异，表明金铁锁是极具开发价值的治疗类风湿性关节炎的一 种新药Ⅲ 。

 王美娥等报道了金铁锁水煎浸膏对RA的镇痛作用，并 阐述了其作用机制。试验结果表明，金铁锁可能通过促进5一 HT的合成和(或)加速5一HT的释放和利用，使其合成率大于 利用率而使5一HT神经递质在脑中含量增加。脑中5-HT有 镇痛效应，5-HT及其代谢产物5-HIAA及5-HTP含量的增高 有利于镇痛，其含量的增加可能是由于金铁锁促进其合成和 释放和(或)促进其利用率，但合成速率大于其利用率故净含 量增加而产生镇痛作用 。

 王学勇等通过观察金铁锁总皂苷( Frr)对佐剂性关节 炎(AA)大鼠炎性痛阀及炎性组织液中丙二醛(MDA)和皮 质醇(Cor)水平的影响来探讨其镇痛抗炎作用及其作用机 理。结果表明，Ts 能有效提高AA大鼠致炎足的痛闽，降 低炎性组织液中MDA，双向调节AA大鼠血中Cor的水平： TSPrr具有良好的抗炎镇痛作用，其作用机理与降低MDA、调 节Cor水平有关。同时还考察了 Pr抗RA的药理作用及 作用机制，结果证明，Tsfrr具有良好的抗RA作用，其作用机 制与抑制促炎细胞因子IL—IB、TNF— 的水平有关 。

 杨莲等分别用热板法和扭体法对浸膏、总皂苷及去总皂 苷部分进行了比较研究。结果表明，3部分各剂量对热板法 动物模型均无镇痛作用；而浸膏和总皂苷各剂量对扭体法动 物模型有较明显的镇痛作用，去总皂苷部分则无作用。金铁 锁浓度70％ 乙醇总提取物与金铁锁总皂苷对扭体法模型有 明显的镇痛作用。金铁锁镇痛作用部位可能在外周，镇痛成 分与所含的总皂苷有关。但镇痛机制还不明确 。目前， 中国中医科学院中药所科研人员发现，金铁锁总皂苷具有良好的抗RA作用，并认为其作用机制与抑制促炎细胞因子白 细胞介(IL)一1 B、肿瘤坏死因子TNF- 的水平有关 。

 3 金铁锁生物学特征

 谢晖等对金铁锁居群繁殖生物学特性进行了初步研究。 结果表明，金铁锁的空间格局为成群型，自然条件下通过种 子繁殖，开花传粉过程约需7 d，传粉方式可能为虫媒、异花 授粉，只有顶花形成果实，结实率在50％ 以下。果实约经一 个月的生长后成熟，随即散布，散布机制可能有2种：①借助 动物(主要是放牧的羊等家畜)和人散布；②弹力散布，当蒴 果成熟时，种子借果实开裂而弹出。杨耀文等对云南昆 明、鹤庆、中旬3个不同金铁锁居群进行了居群遗传研究。 结果表明，金铁锁居群内遗传多样性较为丰富，同时居群间 有较大的分化，因此在进行种质资源保护时，应该对其居群 内和居群间的遗传多样性给予同等的重视 。潘跃芝等对 金铁锁的细胞学进行研究，结果发现，金铁锁间期核属简单 染色中心型，前期核属中间型，染色体数目2n=28，与蝇子草 属不符，因此支持将金铁锁从蝇子草属中分出来单作一个 属。从染色体数目来看，该属为石竹科的肥皂草属 。钟 雁等对金铁锁的生物学特性进行了研究。结果表明，金铁锁 为喜阳植物，耐旱、耐贫瘠，忌积水，水分过多易引起根腐烂。 主根发达，钻透能力强，可深入土中4o一50 em。4月开始萌 芽，6—9月陆续开花，花期不一致，花紫色。种子成熟约需 30 d，7—10月果实陆续成熟，为蒴果，由绿色转变成黄色，成 熟后自然脱落，长棍棒形，内有一粒种子；种子为长倒卵形、 扁平、褐色，长3 l-nln。10月后地上部分茎叶干枯，进入休眠 期。并提出金铁锁生态环境遭受严重破坏，加上本身生理特 点致使金铁锁分布范围狭窄，其种群个体数量大量减少使其 濒临灭绝。为保护资源，金铁锁开发利用应走种植和深精加 工的道路 。赵立久等对金铁锁的生物学特性、适应性进 行了探讨，并分析了金铁锁濒危因素。结果发现，金铁锁生 态环境正遭受严重破坏，加上其本身生理特点，致使金铁锁 分布区域狭窄，其种群个体数量大量减少 。

 4 讨论

 4．1 提取方法及含量测定 目前对金铁锁根粉的提取方法 为：浓度80％ ～9o％ 的乙醇回流提取3次。每次4 b。减压 下，对乙醇提取物浓缩。然后可以采用3种方法来分离纯 化：①丙酮沉淀法；② 正丁醇萃取法；⑧ 大孑L吸附树脂吸附 法。从成本和可行性方面看，方法① 由于丙酮相对价格较 贵，且丙酮沉淀物过滤比较困难，易吸潮，不易操作，提取率 最低，难以推广到现代化大生产中，只能作为试验研究用；方 法②的成本比方法①要低一些，萃取过程基本能稳定控制， 所用溶剂正丁醇的毒性低，但正丁醇沸点很高，回收溶剂较 困难，温度过高会影响提取成分的稳定性；方法③选择性好、 机械强度高，解吸附陕速，再生处理方便，可反复使用等多种 优点，并且所用洗脱剂乙醇经济低毒，易于推广到生产中。

 就目前该方面研究的现状来看，存在3个方面的不足-． ①提取方法单一，目前对会铁锁的提取方法仅有乙醇回流提 取。许多先进的提取技术如超声、微波、半仿生、酶等提取的 应用还未见有人报道。为了满足当今研究的需要，必须对金 铁锁提取方法进行广泛和深入的研究，提高提取效率。②对有效成分和各成分含量测定的研究不多。目前所知金铁锁 的活性成分为皂甙，皂甙中有多少个活性成分尚不清楚，应 深入研究皂甙的分离技术和含量测定方法，研究各活性成分 的分子结构。以利于在资源日渐枯竭的今天进行仿生合成。 ③ 目前金铁锁的提取仅对根进行，而对地上部位的提取研究 还无人涉及。应加强除根以外的其他部位的提取、分析、药 理等方面的研究，使其在资源得以保护的同时实现充分合理 的开发和利用。

 4．2 药理研究 目前主要是对金铁锁水煎浸膏、乙醇提取 物及金铁锁总皂苷进行药理研究，但研究不细致、不深入，研 究的对象是许多复杂的成分，没有对其中某个单一的成分进 行药理研究。特别是金铁锁中已发现的系列环肽成分，缺乏 相关的生理活性试验结果，因此金铁锁环肽生物活性及其构 效关系将是一个值得研究的新方向，可望由此发现新的具有 广泛生物活性的石竹科环肽活性成分。另外应进行多种制 剂的药理研究。

 4．3 生物学研究应加强金铁锁的分子生物学和细胞生物 学研究，为金铁锁种质资源保护、种源质量标准的建立和实 施GAP规范种植打下基础；利用细胞培养、组织培养和转基 因技术等现代技术使直接生产金铁锁生理代谢产物成为可 能，该研究将是解决濒危植物保护和稀缺资源利用最有效的 途径和方向。