1 PNS生物样品中药物浓度的检 测方法

 陈霞等嘲采用高效液相色谱(HPLC) 法测定单剂量口服血塞通片的$1／R家犬 血浆中人参皂苷Rgl含量，其回归方程 为Y=I．295667C一3 f相关系数1=-0．9969)，线性范围2．58—51．6 ng／~l，Rgl最低检出 限为2．8 ng， l。Li L等 利用固相萃取 HPLC测定口服和静脉注射PNS后大鼠 尿液的药物浓度，证实高、中、低不同药物 浓度的日内和日间精密度均小于10％，方 法的重复性大于80％，说明此法操作方便 量，具有较高的灵敏度、重现性。王毅等191 利用薄层色谱(TLC)和电喷雾质谱检测 人参皂苷被肠内细菌降解变化情况。马郁 琪等 利用同位素标记法检测Rgl在大 鼠体内相关药动学参数。茅向军等【1】 用 液相色谱一质谱(HPLC—MS)分析三七皂 苷R1在Beagle犬的血药浓度。

 2 PNS及其活性单体的药动学研究

 2．1三七皂苷R1和人参皂苷Rgl的 吸收与分布研究

 冯亮等 采用Wistar大鼠在体肠吸收 模型研究三七皂苷R1和人参皂苷Rgl在 胃肠道的吸收隋况，R1线性范围为0．0033～ 2．0640 g／L，Rgl和0．0032—1．9760扎，最低 检测限分别为0．0007 g／L，及0．0006 g／L， 检测发现R1和Rgl肠道吸收速率大于 胃，肠道中十二指肠吸收速率，又快于空 肠和回肠，证实R1和Rgl可由全肠道吸 收，吸收速率最高是在十二指肠，最低在 胃。杜力军等【。 究出人参皂苷Rgl在正 常大鼠体内呈二室模型，分布相半衰期【t J 为8 min，消除相半衰期[t 为Ⅱh，平均 驻留时间3．3 h。脑缺血状态下大鼠给药 2 h后其血浆浓度持续高于正常生理状态， 房室模型中分布相 明显长于正常状态 鼠。Liang等[ 41证实给药剂量为1，10，100 mg时Rl和Rgl的吸收速率常数分别为 0．1223 h一，0．0946 h ，0．0904 h 和0．1169 h一，0．1 134 h～，0．1089 h～。韩曼等f 以PNS 溶液灌胃、十二指肠及门静脉给药后测得 Rbl在SD雄性大鼠的绝对生物利用度分 别为0．71、2．75和65．77％ ，Rg1分别为 3．29、6．60和50．56％，PNS中其他成分对 Rbl或Rgl的吸收特性影响不明显，但胃 液的酸性环境、大肠菌丛产生的酶及肝脏 的首过作用均对其口服吸收有影响，肠道 黏膜低透过性直接影响其口服吸收，实验 证实三七人参皂苷Rgl原形在胃肠吸收 较差，生物利用度低，但代谢后吸收却增加，体内分布广泛。

 2．2人参皂苷Rgl和Rbl的代谢研究

 王毅等跚证实在人类肠菌作用下人参 皂苷Rgl可生成人参皂苷Rhl和20(s)一 原人参三醇2种代谢产物，而通过在大鼠 肠菌的作用生成3种代谢产物：人参皂苷 Rhl、人参皂苷Fl和20(s)一原人参三醇， 结果差异较大，推测与采用的检测方法不 同有关。Han M等[16,17】以Caco一2细胞模型 进行体外模型试验，研究静脉给予大鼠三 七皂苷后人参皂苷Rgl和Rbl的浓度， 发现10h后Rgl及Rbl的胆汁排泄累积 量分别为给药剂量的61．48％~18．30％和 3．94％+1．49％；灌胃给药后12 h，Rgl及 Rbl胆汁排泄累积量分别为给药剂量的 0．91％±0．51％和0．055％±0．02％， 两者的 血浆蛋白结合率分别为6．56％～12．74％和 80．11％～89．69％，Rgl的胃、肠和肝通过率 分别为49．85％、l3．05％ 和50．56％ ，Rbl 则为25．82％、4．18％和65．77％，认为肠壁 吸收差是造成Rgl和Rbl生物利用度低 的主要原因，证实Rgl具有较高的胆汁 排泄和较低的血浆蛋白结合率，Rbl的胆 汁排泄较低，而血浆蛋白结合率较高， Rbl的肠黏膜透过性和体内消除速度都 低于Rgl。

 2．3 PNS及其活性单体的药动学参数 及房室模型研究

 Xu等Ⅱ目以PNS给实验鼠灌胃，Rbl的t l =23．40 min， =17．96 h，口服生物利用 度为4．35％：Rgl的tvz~=24．23 min，t埘 l4． 13 h，口服生物利用度为18．4％，血浆中二 者的药动学过程均符合二室开放模型。马 郁琪等㈣利用鼠尾静脉注射3H—Rgl，其 tv2~a)=0．179 h，tic(C)=25 h，灌胃给予后t = 12 h，c一=4．6 ng／ml，表现为吸收缓慢，残 留时间长，2、4 h的血浆蛋白结合率分别 为29．8％与27．6％，粪、尿排泄总量之比约 为4．4：1，证实Rgl在体内呈二室模型。 何希辉等091分别对正常和脑缺血再灌注大 鼠静脉注射PNS，正常状态下其活性单体 Rl和Rgl的tl／2~Vd分别为21．6~7．9 min 和20．8~3．7 min、418．7~85．9 mg／kg和1．20~ 0．18 mg／kg，但在脑缺血再灌注病理状态下， R1和Rgl的t Vd分别为19．2~5．0 min 和20．0~5．2 min、416．7~58．9 Ixg·ml ·min和1368．0~186．3 I,zg·ml ·min一，表明三七 皂苷R1、Rgl在正常和脑缺血30 min后 再灌注状态下的药动学变化差异不明显， 二者的血药浓度药动学变化几近同步，提 示正常和缺血30 min再灌注状态对PNS 体内代谢影响有限，推测结构相似组分药 动学特点相似，R1、Rgl药代动力学均呈 一室开放模型。陈霞等[2Ol采用HPLC法测 定口服血塞通分散片的~tlflE家犬血浆中 Rgl浓度，发现Rgl的t， 和AUCn 分别 为75．3~16．7 min和1543．9~157．1 mg· min-’· ，提示Rgl在犬体内呈一室开放模 型。茅向军等⋯1证实三七皂苷R1的血药 浓度一时问曲线符合二室模型，tl 和t 瞄 分别为38．59 min和230．06 min，曲线下面 积(AUC)、中央室分布容积(V)和血浆清除 率fCL1分别为67353．75 mg·ml‘n_1．ml ，3．53 L／kg和0．1068 L·kg。·min～。分析上述结 果有差异的原因可能是检测方法的灵敏 度不同及复方中各个成分之间相互作用 的影响导致药代动力学参数估算的差异。

 3 不同剂型PNS的药动学研究

 3．1 PNS脂质体

 沈央等[2l】采用薄膜分散法制备PNS 脂质体后肺部滴注给药考察其在SD大 鼠体内的药动学，发现大鼠体内人参皂苷 Rbl的药动学参数t】 ( ：7．00 h，tl (∞= 27．72 h，AUC=2218．9 g·h ·ml～，绝对生 物利用度为70．14％，实验中PNS脂质体 外形圆整，包封率78．50％，平均粒径1．5 ／,zm，提示PNS脂质体包封率高，性质稳 定，体外泄漏缓慢，可延长PNS经血循环 时间，提高了经血管外给药途径的PNS 生物利用度。Xiong J等圈发现PNS磷脂 复合体中Rgl和Rbl的AUC分别为 27．38 Ixg·h。·ml 和600．08 g·h ·ml_。， PNS水溶液的Rgl和Rbl的AUC分别 为2．52 g·h i．ml 和92．29 g·h-1．ml～， 即PNS磷脂复合体较其水溶液的口服生 物利用度有很大提高。

 3．2 PNS胶囊

 Xiong J刚研究加入脂质的PNS胶囊 在大鼠肠道的吸收情况，发现其Rgl和 Rbl的AUC分别为207．52~5395 g·h4· mP，l961I72±68660 ·mP，水溶液状态下P N S 的R g l 和R b l 的A U C 分别为7 ． 8 7 ± 2 ． 8 5 斗g 􀂷 h 。􀂷 m l 。 ， 14 8 ． 5 8 ±3 6 ． 7 3 卜Lg ‘ h 。‘ m 1。 ， 说明加入脂质的P N S 胶囊可提高其生物 利用度。

 3 ． 3 P N S 凝胶透皮贴剂

 张梅等⋯ 采用离体小白鼠鼠皮透皮 实验法测定P N S 透皮量， 以2 4 h 透皮 吸收的累积量及各时间段内的累积量 得曲线方程M = 0 ． 6 9 6 7 + 0 ． 1 6 5 1 H (r = 0 ． 9 8 3 7 ) ， 当总皂苷含量为2 2 _． 0 0 9 m g 时， 2 4 h 透皮吸收率为2 1 ． 1 7 ％ 。徐白等【矧以 智能透皮试验仪研究P N s 中人参皂苷 R g l 在s D 大鼠体外透皮吸收情况， 采用 H P L C 法检测透过及滞留在皮肤内的 № 1 ， 认为药物脂质体分散于凝胶基质中 可减少脂质体的聚集从而增加其稳定 性， 且体系黏度增大可延长药物在皮肤 表面的保留时间， 有利药物的经皮渗透 和皮肤深层滞留。

 3 ． 4 P N S 鼻腔用混悬液

 吴云娟等_删通过建立动物急性缺血 性心肌梗死模型， 研究P N s 鼻腔用粉雾 剂(混悬液) 在大鼠体内的药动学， 标准曲 线范围内提取回收率5 7 ． 9 7 ％ ～ 6 2 ． 9 9 ％ ， 方 法回收率9 5 ． 9 6 ％ 一10 3 ． 5 0 ％ ， 绝对生物利 用度10 3 ． 5 6 ％ ， 认为单次鼻腔给予混悬液 R g l 的体内双室模型过程和生物利用度 与大鼠单次静脉注射血塞通注射液一致， 药效学的结果说明混悬液鼻腔给药可显 著降低大鼠急性缺血性心肌梗塞面积， 明 显缓解沙鼠脑缺血再灌注引起的脑水肿 和卒中症状， 且此种保护作用属于剂量依 赖性， 剂量越高， 保护作用越强。

 3 ． 5 P N S 微孚L剂

 韩曼等m 筛选P N S 制成油包水微乳处方以提高R b l 在体内肠吸收， 并采用 平行人工膜等模型对制剂进行质量评价， 他们由雄性S D 大鼠十二指肠部位注入 剂量为4 m 肌g 微乳， 不同时间点眼眶取 血， 静置， 离心取血测血药浓度， 计算 A U c 等药动学参数， 发现稀释后微乳中 药物的有效透过系数( P e ) 多数高于P N S 对照液， 认为微乳中的组分可提高药物的 膜透过能力， 稀释前微乳的P e 与大鼠体 内肠吸收具有相对较好的直线相关性(r = 0 ． 7 7 4 0 ) ， 证实w ／0 微乳可促进人参皂苷 R b l 的肠吸收， 推测吸收促进作用与其提 高生物膜流动性正相关。

 3 ． 6 P N S 片剂

 陈霞等【28】通过检测口服血塞通分散 片后犬血浆中R g l 的t — c — A u C 来评 价该药的生物利用度， 血塞通分散片和血 塞通片中R gl 的t n 分别为5 5 ． 6 6 ± 1 3 ． 6 4 m i n 和7 5 -3 2 ± 1 6 ． 7 0 m i n ， t m a x 分别为 5 6 ． 7 ±5 ． 2 m i n 和3 1 ． 7 ±4 ． 1 m i n ， A U C “ h 1分 别为1 5 0 2 ．4 5 ±2 7 1 ． 9 5 斗g 􀂷 m i n 一’ 􀂷 m 1 。和 1 5 4 3 ． 9 3 ± 1 5 7 ． 0 7 仙g 􀂷 m i n 一’􀂷 m l ～ ， 以血塞通 片换算出血塞通分散片的相对生物利用 度为1 0 6 ． 7 ±2 7 ． 6 ％ ， 认为血塞通分散片的 生物利用度优于血塞通片。

 3 -7 P N S 注射液

 血塞通注射液是P N S 的葡萄糖灭菌 水溶液， 赵文萃等㈣建立R P — H P L C 法， 测 定静脉注射血塞通注射液的大耳白兔血 浆中人参皂苷R b l 浓度， 其线性方程为 Y = 0 ． 0 0 0 0 0 1 0 3 6 X + 0 ． 1 9 4 8 7 9 8 (I = 0 ． 9 9 9 9 ) ， 线性范围为4 1 ．3 5 ～ 2 6 5 ． 4 0 斗g — m l 。其药动 学参数为：V c = O． 2 7 0 7 L ，K 】2 = 0 ． 4 3 7 6 m i n ～ ， K 越 = O-3 8 1 2 m i n 一 ， K 帕 = 0 ． 0 0 8 8 m i n ～ ， t 舵( 曲= 0 ． 8 4 1 7 m i n ， t 】n ( 。 = 1 6 9 ． 8 8 m i n ， C L = 2 ．3 8 6n ll ／m i n ， 研究表明静脉注射血塞通注射液 后其体内分布符合静脉注射二室开放模 型， 血塞通注射液在血中的分布和消除过 程较为迟缓。

 4 结语与展望

 P N S 多项研究表明它在抑制血栓形 成，扩张外周血管， 降低血压， 治疗心脑血管 疾病疗效显著，其分别在血液系统、心脑血 管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿 瘤等方面均有较好活性∞ ”】 。 最近有报道朗 P N S 可通过抑制脂质过氧化反应， 减轻病 鼠心肌细胞的病理损伤， 增强抗氧化， 改 善急性心肌梗死后左室重构心肌细胞 形态学结构。现有的P N S 药动学研究仅 涉及P N S 给药后2 ～ 3 个单体皂苷的体 内药动学， 未能全面反映P N S 的药动学 变化规律， 而P N s 在急性心肌梗塞状态 下多种成分的药动学研究尚未见报道， 且缺少P N s 体内药动药效学研究数据， 因此P N S 血药浓度与药物效应关系仍 未明确， 三七及其制剂的相关药动学特 性研究有待深入， 另外， P N S 制剂的其 他药物或辅料与其配伍应用及制备三 七新型给药系统部可能对药物的药效 及药动学产生一定影响。生物样品检测 方法的建立和验证是整个药代动力学 研究的基础， 进行药动学研究首先应建 立灵敏、特异、准确的定量分析方法， 目 前对P N S 生物样品中药物浓度的检测 多采用H P L C ， 今后的研究方向及重点 应进一步研究P N S 的化学成分及串联 质谱法作分析手段的可行性并结合作 用机制方面( 药效学) 的研究以揭示其 药动学特性及规律。