桃叶中的柚皮素属于黄酮类物质， 它是柚皮甙的甙 元，但是有关桃叶中柚皮素提取研究的文献并不多， 国 外这方面的研究几乎为空白【 ， 国内研究也不多见。

 本文将超临界CO：萃取技术应用于桃叶柚皮素的提 取， 以期获得品质优良的柚皮素提取物产品。

 1 材料与方法

 1．1 材料、仪器与设备

 1．1．1 材料

 桃叶乾县果园；柚皮素标准品(纯度98％) ：CO：气体(纯度99．5％) 咸阳秦虹气体 公司；薄层层析硅胶；CMC；95％ 乙醇、无水乙醇、 甲醇、乙酸乙酯、三氯化铝、氯仿(均为分析纯)。

 1．1．2 仪器与设备

 超临界萃取装置(型号HA1 20-40．01) 江苏南通华安 超临界萃取公司； 倾斜式高速万能粉碎机(型号FW。 400A) 北京中兴伟业仪器有限公司；紫外。可见分光光 度计(型号UV．754) 上海精密科学仪器有限公司。

 1．2 方法

 1．2．1 不同预处理方法的比较

 采用晒干和烘干两种方法对桃叶进行干燥预处理。 通过试验发现晒干的桃叶比烘干的桃叶萃取效果好，所 以本文采用晒干的桃叶进行萃取试验研究。

 1．2．2 萃取流程

 桃叶一干燥一粉碎一过筛一混合一萃取一粗提物

 准确称取50g桃叶粉，加入一定量的95％ 乙醇，搅 拌均匀后加入到萃取釜中在不同的萃取条件下进行萃 取。萃取产物用少量95％ 乙醇溶解后过滤， 再用95％ 乙醇定容至250ml， 作为待测液。

 1．2．3 萃取条件

 本文主要研究萃取温度、萃取压力、萃取时间和 料液比(桃叶与95％ 乙醇的质量比)对柚皮素萃取结果的影 响。运用L，(3·)正交试验表设计试验，各因素水平见表 1。试验中C02流速控制在20kg／h左右，分离压力为 10MPa， 分离温度为25℃ 。

 1．2．4 桃叶萃取物中柚皮素测定方法的建立

 柚皮素属于黄酮类化合物，一般黄酮类化合物采用NaNO：．AI(NO， NaOH[3i比色法进行测定，但是本文 所得到的萃取物中叶绿素含量较高， 对该比色法干扰十 分明显。另外此比色法主要用于总黄酮的测定， 桃叶 成分复杂， 并不是只含有柚皮素这一种黄酮类物质， 所以该法并不适用于桃叶萃取物中对柚皮素的定量分 析。本文通过试验， 建立了一种测定萃取物中柚皮素 的方法。

 首先， 本文采用薄层层析法(TLC)对萃取物进行定 性分析(见图1)，薄层条件如文献【4】所述。试验发现， 在365nm紫外灯下，在相同位移处萃取物与柚皮素标准 品均显黄绿色荧光，证明了萃取物中有柚皮素存在。然 后对柚皮素标准品溶液和萃取液在200~800nm之间进行 多次扫描，结果见图2、3。由图可知二者在325nm处 均有吸收峰，故可采用紫外分光光度法测定萃取液中柚 皮素的含量， 并确定定量测定柚皮素的吸收波长为 325am 。

 1．2．5 标准曲线的绘制

 准确称取0．005g柚皮素标准品， 用95％ 乙醇溶解 定容至50ml。分别精密吸取该溶液1．0、2．0、3．0、 4．0、5．0、6．0、7．0、8．0、9．0ml于9个10ml容量瓶 中，用95％ 乙醇定容至刻度，然后在325nm下以95％ 乙醇为参比测定各标准稀释液的吸光度， 其结果见表

 2。线性回归后，得柚皮素浓度与吸光度的标准曲线 方程：

 A =0．0117C+0．032

 式中：A为吸光度；C为浓度(ug／m1)。

 该方程的线性相关系数r=O．9994，满足线性要求。

 12．6 桃叶柚皮素含量的测定

 取0．1ml 1．2．2中的待测液，用95％ 的乙醇定容至 25m1，按照1．2．4中所述方法测定稀释液中柚皮素的浓 度， 然后按下式计算柚皮素得率：

 2 结果与分析

 试验结果及极差分析如表3所示，各因素影响作用 见图5。

 由极差分析可以看出，各因素对柚皮素得率影响的 主次顺序为：A>C>B>D， 即萃取温度>萃取时 间>萃取压力>料液比。最佳萃取条件为A，B：C3D-， 即萃取温度为60"C、萃取压力为30MPa、萃取时间为6h、 料液比为1：2．0。

 结果显示， 温度对萃取结果影响最大。温度升 高，流体的传质速度增大，利于传质；温度升高， 被 萃取物质的挥发性增大，利于成分的溶出。从温度K值 可以看出，温度由40℃ 增加到50℃ 时， 柚皮素得率有 较大幅度提高。而当温度由50℃增加到60℃ ，得率增 加的幅度就没有前者大。这是由于温度的增大的同时， CO：流体密度也随之减小了，这对萃取产生了一个负面 的影响。温度增加的幅度越大， 这种负面影响的作用 也越明显。

 萃取时间对萃取结果的影响也较大。萃取时间达到 6h时，萃取结果达到最大。萃取压力对萃取结果的影 响次于萃取时间的影响。压力的增大， 超临界CO：流 体的密度增大，有利于成分的溶出； 压力增大， 超临 界CO2流体的扩散系数也随之减小， 不利于成分的溶 出。压力K值表明，当压力由25MPa增加到30MPa时， 萃取结果明显增大。但当压力由30MPa增加到35MPa 时， 萃取结果却下降了， 这是由于此时扩散系数降低 的负面影响起到了比较大作用。

 料液比对萃取结果的影响最小。柚皮素属于中极性 化合物， 分子结构如图4所示。对于极性物质用超临界 C02进行萃取时需要加入夹带剂来改变流体的极性【 。 本文也通过试验得出，不加夹带剂几乎不能将柚皮素萃 取出来。乙醇由于具有无毒无害等优点， 所以是最常 用的夹带剂。本试验选用95％ 乙醇为夹带剂可以实现桃 叶中柚皮素的萃取。但是乙醇的添加量越大，萃取结 果反而越小。这是由于随着乙醇用量增大，超临界CO： 流体的极性也随之增大，这样使得极性较柚皮素大的物 质更易溶出， 从而使柚皮素的得率下降。

 由于最优组合在正交试验中未出现过， 所以需要在 此条件下进行验证试验。在此最优条件下， 通过三次 重复试验发现，柚皮素平均得率可以达到2．18％ 。采用本文所述的提取方法， 从100g晒干桃叶中可得6g粗提 物，其中柚皮素含量为2．18g，纯度为36．33％。柚皮 素作为黄酮类化合物的一种， 目前尚未见有关其提取的 研究报道，而目前对黄酮类物质提取研究较多的是银杏 叶中黄酮类化合物的提取。有资料报道【 】，采用乙醇提 取法可以从银杏叶中得到总黄酮含量为14％～l8％ 的粗 提物， 再经过D1O1大孔吸附树脂纯化后可以使总黄酮 纯度提高到24％~29％。而采用本文所述方法， 未经过 纯化的粗提取中柚皮素纯度就已经达到了35％ 以上，可 见粗提物中柚皮素的含量相对较高，可以作为提取物粗品进行使用。

 3 结论

 3．1 采用超临界CO2萃取技术可以实现桃叶中柚皮素的 提取。超临界CO2萃取柚皮素最佳工艺条件为：萃取温 度60℃ ，萃取压力30MPa，萃取时间6h，料液比1：2．0 (桃叶与95％ 乙醇的质量比)。在此条件下，柚皮素得率 可以达到2．18％ 。

 3．2 由于萃取物中含有大量的叶绿素， 产品外观颜色 为绿色， 柚皮素本身的颜色为淡黄色， 为提高产品品 质， 今后有必要进一步开展柚皮素的纯化研究。