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| RP-HPLC测定2种产地板栗种仁中原儿茶酸的含量 |
板栗Castanea mallissima Blume为壳斗科栗属落
叶乔木板栗树的果实_l J， 异名为栗实(《新修本
草》)、栗果(《滇南本草》)、大栗(《天目山药用植
物志》)等 J。板栗性温、味甘，有养胃、健脾、
补。肾、壮腰、强筋、活血、止血、消肿等功效。中
医认为栗子对肾虚有良好的疗效，故又名“肾之
果” 3 J。板栗作为药用在历代的医药古籍中均有记
载，入药部位包括板栗的树根、树皮、叶、花、外
果皮(栗壳)、内果皮、总苞(栗毛球或壳斗)、种仁
等 。据文献报道及本课题组的前期研究结果表
明 J，板栗种仁中主要含有挥发油、有机酸、黄
酮、生物碱、三萜、糖等化学成分。有机酸主要含
有原儿茶酸、没食子酸、山楂酸、对羟基苯甲酸等。
药理研究表明，原儿茶酸具有抗菌、抗炎、抗病毒
等作用，此外还具有降低心肌耗氧量、缓解心绞痛
等作用，在治疗心血管疾病方面有良好的活性_8 ，
是板栗种仁中有机酸类活性成分之一。目前，板栗
种仁中原儿茶酸的含量测定未见文献报道，本研究
首次建立了HPLC测定板栗种仁中原儿茶酸含量的
方法，并对辽宁丹东、河北迁西两种产地板栗种仁
原儿茶酸的含量进行了测定，为板栗的质量控制提
供科学依据。
1 仪器与试药
1．1仪器
高效液相色谱仪(日本岛津LC．10AT vp，SPD．
10A vp检测器，日本Shimadzu公司，N2000色谱工作站，浙江大学智达信息工程有限公司)。
1．2试药
原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所，批
号110809-200503，供含量测定用)，磷酸、甲醇为
色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
板栗供试品分别从河北迁西、辽宁丹东同期采
集，经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为Castanea
maUissima Blume的果实，样品保存于沈阳药科大学
中药学院天然药物化学研究室。
2 方法与结果
2．1色谱条件选择及系统适用性试验
色谱柱：Diamonsil ODS C18(4．6mm×250mm，
5}xm)；流动相：甲醇一0．1％ 磷酸(8：92)；检测波
长：259nm；流速：0．8mL·min～；柱温：25℃ ；进
样量：101．LL。理论塔板数按原儿茶酸计，均不低于
3 000。对照品及供试品色谱图见图1。
2．2对照品溶液的制备
精密称取原儿茶酸对照品0．011 0g，置lOmL量
瓶中，加入甲醇至刻度，作为贮备液。从中精密量
取2mL置100mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，
再从中精密量取15mL置25mL量瓶中加入甲醇至刻
度，摇匀，即得含原儿茶酸0．013 2mg·mL 的对照
品溶液，0．45Ixm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2．3供试品溶液的制备
取板栗种仁粉末(过65目筛)约5g，精密称定，
置具塞锥形瓶中，精密加入4mol·L 盐酸溶液500mL，水浴加热3．5h，取出放冷，过滤，精密量
取50mL续滤液，转移至分液漏斗中用乙醚等量梯
度萃取3次，合并乙醚萃取液，回收乙醚，残渣用
甲醇溶解转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀，0．45 m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2．4线性关系的考察
精密量取原儿茶酸对照品溶液，分别进样2，
5，10，15，20p~L，每个重复3次，计算色谱峰面积
平均积分值，得到色谱峰面积y与进样量 ( g)之
间的回归方程式为：Y=3．241×10 X一196．8，r=
0．999 9，结果表明原儿茶酸在0．026 4～0．264 0lxg
与峰面积呈良好的线性关系。
2．5精密度试验
取原儿茶酸对照品溶液，按上述色谱条件连续
重复进样6次，计算仪器精密度RSD=1．8％。
2．6重复性试验
取同一批样品6份，制备供试品溶液，在上述
色谱条件下进行测定，结果求得原儿茶酸的
RSD=1．2％ 。
2．7稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24h
进样，经计算RSD=1．5％，表明供试品溶液在24h
内稳定。
2．8回收率试验
精密称取6份已知含量的板栗种仁粉末各2．5g，
分别精密加人原儿茶酸对照品储备液0．4mL，照2．项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，
计算回收率，结果见表1。
2．9供试品测定
照2．3项下方法制备供试品溶液，精密量取对
照品溶液101xL、供试品溶液10txL，按上述色谱条
件测定供试品中原儿茶酸的含量，结果见表2。
3 讨论
供试品提取方法的选择曾考察用酸水、蒸馏水、
不同浓度甲醇、乙醇超声及回流等多种提取方法，
结果表明用4mol·L 盐酸溶液500mL，沸水浴中加
热水解3．5h，提取效率最高，结合文献 ，建议采
用酸水提取的方法作为供试品的前处理方法。另外，
在测定供试品中原儿茶酸的含量时，采用乙醚萃取
的方法来对样品进行预处理，减少了杂质色谱峰的
干扰。
测定结果表明，河北迁西板栗种仁中原儿茶酸
含量较高，为0．177 5mg·g～。辽宁丹东板栗种仁中
原儿茶酸含量为0．018 2mg·g～。通过对2种不同产
地板栗种仁中原儿茶酸的含量测定的比较，为进一
步开发此药食同源的植物资源提供科学依据。
本论文首次建立了HPLC测定板栗种仁中原儿
茶酸含量的方法，可用于板栗及相关产品的质量评
价和控制.
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