五味子为木兰科( Magnoliacene) 植物五味子
Schisa ndr a chinensi s(T urcz ) Baill 或华中五味子
Schisandra sphenanthera Rehd et Wils 的干燥成
熟果实。前者习称北五味子, 后者习称南五味子。
1985 版及以前的药典中, 南、北五味子是作为同一品
种应用的, %中国药典&2000 版则将南、北五味子分别
列出, 作为两种药材应用。%本草纲目&言: #五味子
今有南北之分, 南产者红北产者黑, 入滋补药, 必用
北者乃良, 现临床入药也以北五味子为主。南、北
五味子化学成分相近, 均含有挥发油、木脂素及有机
酸等成分[ 1] , 皆具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心
之功效[ 2] , 但市场上北五味子的价格远高于南五味
子。目前, 五味子的研究多集中在北五味子的成分分析及药效的研究上, 而对于两者在成分含量及药
效等方面的异同却少有研究。本文采用高效液相色
谱法测定了南、北五味子及其炮制品中原儿茶酸的
含量, 为南、北五味子的鉴别及临床的合理应用提供
参考依据。
1 实验材料
1 1 仪器与试剂MET TLER TOLEDO AG135 电
子天平( 瑞士) ; SCQ250 超声仪( 上海申波超声公
司) ; 可控硅控温水浴锅( 上海锦屏仪器仪表有限公
司) ; Aglient 1100 series 高效液相色谱仪, 四元泵,
DAD 检测器( 美国安捷伦科技有限公司) ; 乙腈( 色
谱纯, 德国默克公司) , 正己烷、甲醇( 分析纯) 、超纯
水。对照品: 原儿茶酸( 0809 9201, 供含量测定用, 中国药品生物制品检定所) 。
1 2 药材南五味子( 批次/ 批号: 040401, ( /
040518, ) / 040825; 产地依次为: 陕西, 辽宁, 陕西) ,
未经炮制者简称生南; 经炮制者简称制南; 北五味子
( 批次/ 批号: 040413, ( / 040527, ) / 040825; 产
地依次为: 辽宁, 河北, 辽宁) , 未经炮制者简称生北,
经炮制者简称制北; 以上药材均购自浙江中医药大
学中药饮片厂并经浙江中医药大学陈孔荣老师鉴
定。各药材品种为木兰科( Magnoliacene) 五味子
Schisandra chinensis (T urcz ) Baill 和华中五味子
Schisandra sphenanthera Rehd et Wils ; 各制品均
由相应生品参照醋蒸法( 药典附录IID) 炮制而得。
2 方法[ 3 4] 与结果
2 1 色谱条件及系统适应性色谱柱: DiamonsilT M
C18 ( 250 4 6 mm, 5 m) ; 柱温: 30 ; 流动相: 乙腈
水冰醋酸 ; 流速: 1 0 mL ! min- 1 ; 波
长: 260 nm。在上述实验条件下, 原儿茶酸与药材中
其它组分能达到基线分离。见图1。最小理论塔板
数以原儿茶酸色谱峰计应2000。
2 2 原儿茶酸对照品溶液的制备取原儿茶酸对
照品约5mg, 精密称定, 置10mL 容量瓶中, 加甲醇
溶解并稀释至刻度, 密塞, 摇匀, 得原儿茶酸对照品
贮备液( 每毫升溶液含原儿茶酸0 54mg) 。
2 3 供试品溶液的制备取过20 目筛的五味子药
材粉约0 5g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加入
L 体积分数为6 % 乙醇, 称重, 超声提取
3 , 取出, 擦干外部, 称重, 用6 % 乙醇补足减失重量, 摇匀, 过滤, 取续滤液10mL, 水浴蒸干, 残渣用
酸水溶解并转移至60mL 分液漏斗中, 用乙酸乙酯萃
取3 次( 10mL/ 次) , 分取乙酸乙酯层, 水浴挥干, 残渣
用甲醇溶解并转移至10mL 容量瓶中, 加甲醇稀释至
刻度, 密塞, 摇匀。进样前过0 22 m 滤膜, 进样
量10 L。
2 4 线性范围试验精密移取对照品溶液0 10、0 30、
0 50、0 70、0 90mL, 置10mL 容量瓶中, 加甲醇稀释至刻
度, 密塞, 摇匀, 按#2 1条件测定, 进样20 L。以质量
( g)为横坐标X, 峰面积为纵坐标Y, 进行线性回归, 得
回归方程为Y= 2553 9X 22 037, r = 0 9999; 原儿茶酸
在0 11~ 0 97 g 内呈良好的线性关系。
2 5 精密度试验取同一浓度的原儿茶酸对照品
溶液, 按#2 1条件重复进样5 次, 进样20 L 测得峰面
积的RSD 为0 4% , 符合精密度要求(RSD+ 3%) 。
2 6 稳定性试验取同一样品溶液分别在0、1、2、
4、8、12 h, 按#2 1条件测定, 进样10 L, 结果峰面积
的RSD 为1 8%, 符合精密度要求( RSD + 3%) 。表
明原儿茶酸在12h 内稳定性良好。
2 7 重复性试验取同一五味子样品约0 5 g, 精
密称定, 平行6 份, 按#2 3项下方法操作, 制备供试
液, 按#2 1条件测定, 进样10 L, 样品中原儿茶酸
的平均含量为0 076%, RSD 为2 9% , 符合重复性
试验要求(RSD + 3% ) 。
2 8 回收率试验采用加样回收法, 取已知含量的
五味子药材粉约0 25g, 精密称定, 平行6 份, 分别添加
浓度为0 476mg/ ml 的原儿茶酸对照品溶液0 4mL, 按
#2 3项下方法制备供试品溶液, 进样10 L 按#2 1条
件测定峰面积, 计算回收率。见表1。
2 9 五味子药材中原儿茶酸的含量测定分别取
各五味子药材( 过20 目筛) 约0 5g, 称定, 按#2 3项
下方法操作, 制备供试液, 按# 2 1色谱条件测定峰
面积, 计算原儿茶酸的含量。见表。
3 讨论
有机酸为五味子诸多成分之一, 而原儿茶酸为
五味子有机酸中关注较多的成分, 具有抗血小板聚
集、降低心肌耗氧[ 5] 、抑菌、镇痛、拮抗体外培养的神
经干/ 祖细胞凋亡[ 6] 及保护神经[ 7] 等作用。
本实验发现, 三批五味子药材的原儿茶酸的含
量存在差异, 从0 026 % 到0 137 % 不等, 但总体
上, 南五味子药材中原儿茶酸的含量比北五味子要
高。因此, 如是应用于心血管疾病, 则可考虑南五味
子。另外, 南、北五味子制品中原儿茶酸的含量均比
生品中的含量低了近一半, 提示炮制会对五味子药
材中原儿茶酸的含量产生影响。
实验中曾采用甲醇水、甲醇水冰醋
酸、以及乙腈水和为流动相系统, 甲醇酸水系统能达
到基线分离但峰形不佳; 乙腈酸水系统
条件下原儿茶酸的分离度及峰形都较好, 故选择该
系统为流动相。比较了超声提取和回流提取对样品中原儿茶酸含量的影响, 回流提取物中原儿茶酸的
含量略高于超声提取样品中的含量, 但差别不大。
另外, 经乙酸乙酯萃取的样品中原儿茶酸的含量略
有降, 但经萃取的样品杂质峰少, 且原儿茶酸色谱峰
的分离度及峰形均好于未萃取者, 故本文最终选用
甲醇超声提取, 乙酸乙酯萃取的方法来处理样品。
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