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| HPLC法测定血尿胶囊中原儿茶酸的含量 |
血尿胶囊处方收载于卫生部药品标
准《中药成方制剂》第17册，原标准中仅
有试管反应和原儿茶素限量检查，无薄层
鉴别项和含量测定。此次根据国家药品标
准提高行动计划的有关要求，增订了原儿
茶酸的含量测定方法。笔者按照《中国药
典》2005年版一部附录的要求进行了方法
验证，结果表明，该法简便、准确、精
密、重现性好，能客观地控制和评价血尿
胶囊的质量。
1仪器与试药
Shimadzu 2010高效液相色谱仪(带
自动进样器、在线脱气装置)；Sartorius
BS21S分析天平(感量为0．0ling)；Mettler
M5分析天平(1 g)；原儿茶酸对照品(中
国药品生物制品检定所，批号：110810—
200205，供含量测定用)；三批血尿胶囊
及缺棕榈子、菝葜的双阴性对照样品均由
雷允上药业有限公司提供；甲醇为色谱
纯，水为去离子水，其他试剂均为分析
纯。
2方法与结果
2．1色谱条件与系统适用性试验色
谱柱为Agil ent TC—Cl 8柱(5 m，
4．6ram×250mm)；流动相为甲醇一0．1％磷
酸溶液(10：90)；检测波长为260nm；柱温为30．0℃ ；流速为lml·min～；进样量
5 l。
2．2溶液的制备
2．2．1供试品溶液的制备取本品10粒，倾
取内容物，混匀，研细，取约0．5g，精密
称定，加乙醇一醋酸(10：1)50ml，置水浴
上加热回流1h，放冷，滤过，滤液蒸干，
残渣加甲醇使溶解并定容至10ml，摇匀，
滤过，取续滤液，即得。
2．2．2对照品溶液的制备精密称取原儿
茶酸对照品适量，加甲醇制成每ml约含
0．04mg的溶液，即得。
2．2．3阴性对照溶液的制备取缺棕榈子、
菝葜的双阴性对照颗粒适量，按照2．2．1项
下方法制备，得阴性对照溶液。
2．3专属性试验分别精密吸取上述对照
品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各
5 IXl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结
果显示：阴性对照色谱图在与原儿茶酸对
照品色谱峰相应位置处未检出色谱峰，供
试品色谱图中则检出原儿茶酸色谱峰；表
明处方中其他药物对原儿茶酸的测定无干
扰，该方法有较好的专属性。
2，4线性关系考察精密称取原儿茶酸对
照品10．1mg，置50ml量瓶中，加甲醇使
溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮
备液，浓度为0．202mg／ml；分别精密量
取上述对照品贮备液各适量，加甲醇
稀释制成浓度分别为0．1010、0．0606、
0．0303、0．01515、0．0101mg／ml的系列对
照品溶液。精密吸取上述系列浓度的对
照品溶液各5 l注入液相色谱仪，按上述
色谱条件测定蜂面积。以对照品的浓度
为横坐标，峰面积积分值的均值为纵坐
标绘制标准曲线，结果其回归方程为：
Y=19618203x+2618．6，r=0．9999。结果表
明，原儿茶酸在0．05～1．01 g线性关系良
好。
2．5仪器精密度试验取同一份原儿茶酸对
照品溶液(30．03 g·ml )，连续进样测
定6次，依法测定，结果峰面积积分值的
相对标准偏差为0．36％，表明在拟订的色
谱条件下，仪器精密度良好。
2．6溶液稳定性试验取同一份供试品溶
液，分别于第0、2、4、8、12、18、24h
按上述色谱条件进样测定，记录各峰面
积，计算相对标准偏差，结果其RSD为
1．86％ ，表明供试品溶液在24h内保持稳
定。
2．7重复性实验取批号为EC19001的血尿
胶囊样品6份各0．25g，在相同的色谱条件
下测定并计算含量。结果原儿茶酸的平均
含量为1．3660mg·g～、RSD为1．83％，表明
该方法具有较好的重复性。
2．8加样回收试验采用加样回收法，取
已测知含量的血尿胶囊(批号：EC19001、
原儿茶酸含量1．3660mg／g)20粒，倾取
内容物，混匀，研细，取0．25g，精密称
定，分别精密加入原儿茶酸对照品贮备
液(0．1 107mg／m1)3m!，再加乙醇一醋酸
(10：1)溶液47ml，按“供试品溶液的制
备”项下方法同法制备供试品溶液，按
前述色谱条件进样测定，计算回收率。
结果本方法的平均回收率为97．83％，
RSD=1．05％。结果表明：本法回收率较
好、准确度高。
2．9样品含量测定取本品内容物，研细。
取0．5g，精密称定，加乙醇一醋酸(10：1)
溶液50ml，回流提取1h，放冷，滤过，
滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至
lOml，摇匀，滤过，取续滤液，即得含量
测定用供试品溶液。在拟订的色谱条件下
进样测定，按外标法以峰面积计算血尿
胶囊中原儿茶酸的含量，结果3批样品的
含量分别为0．3907 ms／粒、0．3761 ms／粒、
0．3773 ms／粒。
3讨论
3．1提取条件的优化提取方式考察了加
热回流提取、索氏提取和超声处理三种
方式，结果热回流提取和索氏提取效率相
当，二者均较超声提取法高出近12％；从
操作简便的角度出发，提取方式选择加热
回流提取。对提取溶剂的组成、用量等的
考察结果显示：以乙醇一醋酸(10：1)为
溶剂、用量50ml为最佳。此外，还对热回
流的时间和次数进行了研究，结果加热回
流提取一次、时间为lh~[1可基本提尽样品
中的原儿茶酸。综合上述各考察结果，拟
订提取方法为正文中的“供试品溶液的制
备”项下方法。
3．2原儿茶酸的归属 在进行“专属性”
试验时发现：缺棕榈子的血尿胶囊阴性样
品经提取后进样测定，其色谱图中在与原
儿茶酸色谱峰相应位置处可检出一色谱
峰，其峰面积大约相当于供试品色谱中主峰面积的8％ ，这就排除了试验误差，表
明阴性有干扰。关于血尿胶囊中原儿茶酸
的归属问题，分析方面的文献 “ 都将其
归属为方中的棕榈子；而植化方面有文
献 报道菝葜中也含有原儿茶酸。为慎
重起见， 又对10批市售菝葜药材进行了
HPLC—DAD分析测定，采用正文中的液
相色谱条件，主要考察保留时间及DAD在
线扫描光谱图，并将其与原儿茶酸对照品
的相应参数和光谱图进行比对，结果表明
10批菝葜药材中均含有原儿茶酸；同时
还制作了缺棕榈子、菝葜的双阴性样品，
结果排除了干扰，这也从另一角度证实了
血尿胶囊中的原儿茶酸应归属为棕榈子和
菝葜两味药材，只不过棕榈子的贡献更大
而已(>90％ )。相应的，将含量限度
描述为： “每粒含原儿茶酸(C，H O )不
得少于××mg”而不是“每粒含棕榈子
以原儿茶酸(C，H O )计，不得少于X X
m g。
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