金樱子是壮腰健肾丸方中臣药，壮腰健肾丸的含量测定 控制标准是以原儿茶酸和原儿茶醛的含量为指标，而一般认 为 ，该制剂中的原儿茶酸主要来自于方中君药狗脊，但作 者在研究过程中发现，金樱子中也含有较多的原儿茶酸，并 利用HPLC对金樱子中原儿茶酸进行了含量测定方法学研 究。为壮腰健肾丸的质量控制有一定的参考价值。

 1 仪器与试药

 美国Agilent 1100高效液相色谱仪(低压四元泵，柱温 箱，自动进样器，紫外检测器)。原儿茶酸对照品购自中国药 品生物制品检定所(批号为809．200102)，金樱子药材为 ． 。laevigata Michx．的干燥成熟果实，购自湖南双鹤药业，产 地湖南，批号030802。

 甲醇为色谱纯；醋酸为分析纯；水为双蒸水并经 0．45 I．Lm滤膜过滤。

 2 方法与结果

 2．1 色谱条件

 色谱柱：Kromasil Cl8色谱柱(4．6 mm×250 mm，5 I．Lm)， 天津琛航公司。

 检测波长的确定：对原儿茶酸进行uV全波长扫描，确 定其检测波长为260 nm。

 流动相：甲醇一0．8％ 醋酸溶液梯度洗脱(0 min 5：95， 10 min 5：95，20 min 15：85)。流速：1 mL／min。柱温：30℃ 。

 2．2 对照品溶液的制备精密称取12．04 mg原儿茶酸对 照品置50 mL量瓶中，加适量甲醇溶解，并定容至刻度，即得 0．240 8 mg／g原儿茶酸对照品储备液。分别精密量取对照 品溶液0．5，1．0，2．0，3．0，5．0，7．5 mL置10 mL量瓶中，加 甲醇定容至刻度，得6个不同浓度对照品溶液，备用。

 2．3 供试品溶液的制备取金樱子药材粉末2 g，精密称 定，加人2％HC1 5 mL浸润5 min，加20 mL EtOAc回流提取 40 min，滤过，滤渣再加20 mL EtOAc回流提取30 min，滤过， 用5 mL EtOAc荡洗药材粉末1次，滤液合并转入分液漏斗， 加入饱和NaC1溶液2 mL，水洗2次，每次20 mL；转移EtOAc 层到圆底烧瓶中，回收溶剂，残渣加MeOH溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，0．45 I．Lm微孔滤膜过滤即得。

 2．4 线性关系考察精密吸取6个不同浓度原儿茶酸对照 品溶液10 ，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值 为纵坐标，原儿茶酸的含量( g)为横坐标绘制标准曲线，计 算，其回归方程为：Y=0．293 3X一4．355 4，／2=0．999 9，原儿 茶酸在0．120 4～1．806 I．Lg范围内有良好的线性关系。

 2．5 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，重复进样5 次，每次10 ，原儿茶酸的峰面积积分值的RSD小于2％ (n=5)。

 2．6 稳定性试验将同一供试品溶液于室温下放置，在上 述色谱条件下，每隔6 h进样1次，进样7次，测定供试品溶 液中原儿茶酸峰面积积分值，结果RSD小于2％ (n=7)，表 明样品在36 h内稳定。

 2．7 重复性试验取同一批号的金樱子药材5份，按供试 品溶液的制备方法进行处理，各进样10 。结果显示，批 号为030802的金樱子药材中原儿茶酸含量为0．398 mg／g， RSD为2．41％(n=5)。

 2．8 加样回收率试验精密称取9份已知含量0．398 mg／g 的金樱子药材样品(批号：030802)1．5 g；另称取原儿茶酸对照品5．32 mg用甲醇配成25 mL溶液，分别在上述9份药材 中分别加入原儿茶酸对照品溶液4 mL(3份)、2 mL(3份)、1 mL(3份)，按照供试品溶液的制备方法，进行加样回收率试验。结果显示，其平均加样回收率：100．48％ ，RSD=1．41％ (n=9)。

 2．9 金樱子药材中原儿茶酸含量测定结果取不同批次的 金樱子按供试品溶液的制备方法制备样品溶液。分别精密 吸取供试品溶液2O 与对照品溶液lO 注入液相色谱 仪，按上述色谱条件进行测定，原儿茶酸的含量按外标法以 峰面积计算。结果5个不同批号的金樱子药材中原儿茶酸 的含量均大于0．2 mg／g

 3 讨论

 3．1 供试品溶液的制备使用了甲醇超声提取、50％ 乙醇加 热回流提取，所得样品水溶性杂质较多，，样品基线干扰较大， 并对柱效有较大影响。当使用HCI浸润、EtOAC回流提取后 经处理所得样品图谱基线平整、分离度较高。

 3．2 建立了金樱子药材的原儿茶酸含量测定方法，结果表 明该方法准确可靠。

 3．3 在壮腰健肾丸中，根据国家药品监督管理局壮腰健肾丸标准(WS一10446(ZD-0446)-2002) ，壮腰健肾丸一个处 方中含有金樱子200 g，制成水蜜丸1 0t30 g，标准规定制剂中 原儿茶酸的含量不得低于0．15 mg／g，照此计算，一个处方中 有原儿茶酸为0．15 g。从本研究结果可知，金樱子药材中原 儿茶酸含量为不少于0．2 mg／g，壮腰健肾丸一个处方中按 200 g金樱子计算，原儿茶酸的量为0．04 g，占壮腰健肾丸中 原儿茶酸标示含量的的26．7％ 。可见，金樱子的质量对壮腰 健肾丸中原儿茶酸的含量有较大影响，因此建立金樱子药材 的原儿茶酸含量测定方法，对壮腰健肾丸的质量控制有一定 的参考价值。

 3．4 试验过程中收集的样品批次不多，且均为同一产地，还 需收集不同产地的多批样品进行比较试验。