1 仪器与试药

 岛津LC一20A高效液相色谱仪；SPD—M20A二极管阵列检 测器；岛津uV一2550紫外分光光度计；Mettler PB303一N电子分 析天平(准确度：1 mg)；Mettler AE一160电子分析天平(准确： 0．1 mg；Mettler AG一135电子分析天平(准确度：0．Ol mg)； HS10260D型超声清洗器。原儿茶酸对照品(批号：110809— 200102)由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，甲醇、 磷酸均为优级纯，水为超纯水。

 2 方法与结果

 2．1 测定波长的选择用紫外分光光度计对对照品溶液在200 ～ 400 nm波长范围进行扫描，结果在260 nm波长处具有最大吸 收。故选择260 nm作为测定波长。

 2．2 对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加 50％ 甲醇溶液制成每毫升含16 g的溶液，即得。

 2．3 样品提取方法的考察

 2．3．1 醋酸乙酯提取法精密称取本品2 g，加入0．2％盐酸1ml湿润，加入醋酸乙酯50 ml，称定重量，超声提取(250 W，40 kHz)25 min，放置至室温，加醋酸乙酯补足减失的重量，摇匀，过 滤，取滤液25 ml，蒸干，残渣加50％ 甲醇溶解，定量转移至25 mI 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。

 2．3．2 甲醇溶液提取法精密称取本品2 g，加入50％ 甲醇溶 液50 ml，称定重量，超声提取(250 W，40 kHz)30 min，放置至室 温，加50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。

 结果，醋酸乙酯提取法提取产物较甲醇提取法所提的产物的 色谱峰分离清晰，用二极管阵列检测器检测，醋酸乙酯提取法所 提产物的峰纯度高，三点法相似度在0．999以上，故采用选择方 法醋酸乙酯提取法。

 2．4 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，精密称 取2 g，按“2．3．1”方法提取原儿茶酸提取液样品。

 2．5 色谱条件色谱柱为Alhima HP c (250 am×4．6 mm，5 m)；流动相为乙腈一0．2％磷酸(4：96)；柱温40℃ ；流速0．7 ml／min；测定波长260 nm。进样量l0 l。对照品、供试品溶液与 鸡血藤药材提取液的色谱图如图1—3。

 供试品溶液理论踏板数为14 601，结合本法具体情况，暂定 其理论板数按原儿茶酸峰计算，应不得低于5 000。

 2．6 阴性对照实验为进一步考察实验设计的合理性，按原处 方工艺制成不含鸡血藤的阴性对照样品，按“2．5”项下方法测 定，阴性对照样品如图4。由图4可以看出阴性对照色谱中，原儿茶酸峰位置无干扰峰，证明本法是合理可行的。

 2．7 标准曲线的绘制取原儿茶酸对照品适量，加50％ 甲醇溶 液制成16 g／ml的溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，10 Ixl进 样，HPLC测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准 曲线。曲线回归方程为Y：6 368．46X一5．59(r=0．999 99)。表 明进样量在0．016 5—0．165 g内，呈良好的线性关系。

 2．8 方法学考察

 2．8．1 精密度实验取同一供试品溶液10 l，连续进样5次。 结果见表1。结果表明，方法具良好的精密性。

 2．8．2 稳定性实验取同一供试品溶液10 l，分别在0，2．5，6， 9，12 h，照“2．5”项下方法测定峰面积，结果如表2。由表2可以 看出，峰面积RSD为0．68％ ，表明峰面积变化很小，原儿茶酸在 12 h内基本稳定。

 2．8．3 重复性实验取同一供试品5份，按“2．5”项下方法独立 测定。结果见表3。RSD为1．65％ ，结果表明，本法重复性良好。

 2．8．4 回收率实验称取5份已知含量约1 g样品(含量：0．10 rag／片)，精密加入原儿茶酸对照品溶液(0．116 7 g／m1)1 ml，挥 干，按“2．5”方法测定，计算回收率，结果见表4。如表4所示，测 得的平均回收率分别为99．56％ ，RSD=0．39％ ，结果表明，该方 法具有很好的回收率。

 2．9 样品测定及限度要求按“2．5”项下的方法测定样品3 批。结果见表5。如表5所示，3批样品的平均含量为0．10 mg／ 片；按照“2．5”色谱条件测定投料用鸡血藤药材，平均含量为 0．044％。考虑到药材的波动及煎煮过程中的损失，暂定每片含 鸡血藤以原儿茶酸(C，H O )计，不得少于0．08 mg

 2．10 原料药材的测定结果取投料用鸡血藤药材0．8 g，照正 文方法实验。结果见表6。

 3 讨论

 本文采用HPLC法测定补血调经片中原儿茶酸含量，本方法 简便，准确，精密度高，重复性好，能够有效地控制补血调经片的 质量。