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| 川麦冬中麦冬皂苷D对照品的制备 |
麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬ovhiopogon aponicus
(Thunb．)Ke卜Gaw1．的干燥块根，是一味常用于滋阴的中药，
始载于《神农本草经》，历代重要的本草都有记载。麦冬具有
养阴生津、润肺清心的功能，可用于热病伤津、心烦口渴等
症。市售商品浙麦冬、川麦冬均属该种。现代研究发现：麦冬
含有甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分．药理实验表
明其中麦冬皂苷类成分具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常
等作用，在中医临床上用于治疗冠心病、心绞痛并取得了一
定疗效【11。由于缺少麦冬化学成分的对照品，《中国药典)2005
年版(一部)田中麦冬品种项下没有收录麦冬皂苷的含量测定
方法。只收载了以对照药材作为对照的薄层鉴别项，难以对
药材整体的质量进行科学的评价。麦冬皂苷D在川麦冬中含
量较高[31．本文采用常规色谱法和高效液相色谱法相结合，探
索了川麦冬中麦冬皂苷D标准品的分离制备，其分离工艺
简单，便于操作。可以获得大量高纯度的麦冬皂苷D对照
品，可满足常规分析检测的要求，以期为川麦冬的进一步开
发和利用提供参考。
1仪器和材料
1．1实验仪器
Nicolet 710傅里叶变换红外光谱仪(KBr压片)；600 MHz核磁共振波谱仪(Varian公司，TMS作内标)；Agilent 6520四
极杆一飞行时间串联质谱系统；HITACHIPUMP L一2100输液
泵(日立)，Alhech ELSD2000ES检测器(分析之星色谱工作
站)，色谱柱：COSMOSIL C18(250．0 mmx4．6 ulln，5 m)；XI4
型显微熔点仪(上海精密，温度计未校正)；电子天平Mettler
Toledo；旋转蒸发仪RE52—98(上海亚荣)。
1．2实验试剂
HPLC用乙腈为色谱纯．水为重蒸馏水，其余试剂均为
分析纯；柱色谱用硅胶及薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；
Sephadex LH一20(美国Ame~ham)；反相硅胶(Merck)。
1．3药材
麦冬药材产地为四川。购自雅安三九中药材科技产业化
有限公司。并经中国海洋大学生药学博士刘红兵副教授鉴定
为百合科沿阶草属植物麦冬ophiopogonjaponicus(Thunb．J
Ker—Gaw1．。
2方法与结果
2．1川麦冬对照品的制备工艺
取干燥麦冬4 kg块根粉碎，以1O倍量体积分数为80％
的乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇后得
稠膏2 L，加水稀释至10 L，依次用3倍量乙酸乙酯、水饱和
正丁醇萃取。取正丁醇部分样品180 g，经硅胶减压柱层析
(溶剂系统为氯仿：甲醇：水，90：10：1—50：50：5)分成多个部分，经薄层色谱检查合并，得到含麦冬皂苷D为主的部位(氯仿：
甲醇：水，70：30：3)25 g，此部位经加压硅胶柱层析(溶剂系统
为氯仿：甲醇：水，80：20：5)，得到较纯品4．5 g；再经反相硅胶
柱(ODS)进行分离，以甲醇：水(20：80～50：50)梯度洗脱，每次
收集洗脱液100 ml，根据TLC检测结果，合并相同流分，收
集60％～70％甲醇洗脱部分，然后经Sephadex LH一20以95％
乙醇洗脱，经液相检测收集含量大于99％的洗脱液，结晶得
无色针晶(800 mg)。
2．2对照品的结构确证
无色针晶(甲醇)，分子式c44H 00 6，ESI—MS(neg．)m／z 853
『M—H1一，熔点262-263℃，IR l~maxem一1：3 600—3 200(一OH)，
1 640 fC=C)，1 060(C—O—C)，980，920，900，860(intensity 920
<900)， H—NMR(600 MHz，C5D5N)6：4．81( H，d，J=7．2 Hz，
H一1 ，)、5．51( H，d，J=4．8 Hz，H—l，)、5．98( H，br．s，H一1 ，)；
”C—NMR(600 MHz，CsDsN)8：84．3(C一1)、38．0(c一2)、68．2(c一3)、
43．8(C一4)、139．6(C一5)、124．7(C一6)、31．7(C一7)、33．0(C一8)、
50．0(C一9)、50．0(C一10)、24．0(C一11)、40．4(C一12)、40．1(C一13)、
57．1(C一1 4)、32．0(C一15)、81．1(C一1 6)、63．0(C一17)、16．8(C一18)、
14．9(C一19)、41．9(C一2o)、15．0(C一21)、109．2(C-22)、32．4(C一23)、
29．2 (C一24)、30．5 (C一25)、67．0 (C一26)、17．3 (C一27)、fucose
100．4(C一1，)、74．7(C一2，)、85．5(C一3，)、72．6(C一4，)、71．0(C一5，)、
17．1(C一6，)、rhamnose 101．8(C一1 ，)、72．6(C一2 ，)、72．7(C-3 ，)、
74．2(C一4 ，)、69．3(C一5 、19．1(C一6--)、xylose 106．7(C—l ，)、
73．4(C一2 ，)、78．4(C一3 ，)、70．8(C一4 ，)、66．7(C一5 ，)，以上波
谱数据与文献 报道一致。因此确证该化合物为麦冬皂苷D
fophiopogonin D)，见图1。
2．3对照品的纯度和稳定性考察
2．3．1对照品的杂质检查
按薄层色谱鉴别法，选用硅胶薄层，取化合物适量，用甲
醇溶解成每1 IIll含1 mg的溶液，作为供试品溶液。定量吸
取点于硅胶G薄层板上，考察显色情况。结果表明点样量
1 g斑点即非常清楚，可确定薄层色谱的常规点样量为
1 I．zg。分别吸取供试品溶液24 6 10、15 Ixl，点于同一硅胶
G薄层板上，分别以氯仿：甲醇：水(70：30：4下层)、正丁醇：醋
酸：水(4：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，分别以10％硫酸乙
醇和5％香草醛硫酸液为显色剂，105℃加热约10 min． 日光
下检视，薄层板上均只有一个蓝绿色斑点，均未发现杂质斑
点，见图2。
以HPLC法，采用蒸发光散射检测器(ELSD)进行检测，
以峰面积归一化法计算杂质峰占总峰面积的百分数，从而确
定本品的纯度。采用COSMOSILC】8(250 minx4．6 mm，5 m)
色谱柱，以乙腈：水(5347)为流动相，流速1 m~min；柱温：室温；
蒸发光散射检测器飘移管温度99℃。氮气体积流量2．85 L／min，
样品浓度1l1．92~g／r,a，进样量20 ，采集时问比样品保留时间延长1倍以上，归一化法计算，质量分数为99．23％。样
品的质量分数符合国家食品药品监督管理局颁布的《中药
新药研究的技术要求》有关规定，可以作为化学对照品用，
见图3。
2．3．2稳定性考察
将制备的麦冬皂苷D对照品按照10 mg，瓶，分装于棕
色玻璃样品瓶，密封，外套纸盒，参照药品稳定性加速试验的
条件，将其置于40℃ 、相对湿度75％的条件下(药品稳定性
试验箱)，分别于0，1，2，3，6个月取样进行外观、TLC、HPLC
分析。结果证明，麦冬皂苷D对照品外观性状无变化；TLC
检查未出现其他杂质斑点；HPLC未出现其他物质峰．面积
归一化计算纯度的变化(RSD=O．35％)。单位进样质量的峰面
积响应值(RSD=2．04％)，均符合含量测定要求。提示麦冬皂
苷D对照品稳定性较好，可以用于含量分析工作。
3讨论
针对中药所含的有效成分或标志性成分，建立比较客观
的定性鉴别和含量测定指标，提高和完善中药质量标准．是
中药现代化具有明确意义的应用基础研究。
麦冬是中药生脉、参麦等益气固脱、养阴生津的复方的
主药，其所含的皂苷类成分是有效成分之一。麦冬皂苷D在
川麦冬中含量较高，药理实验通过麦冬皂苷D对H20：造模
HUVEC的细胞周期、线粒体膜电位、Ca：+等方面的变化表
明，麦冬皂苷D能保护血管内皮细胞凋亡、稳定线粒体膜电
位、减轻细胞通透性、防止钙离子内流增加。小鼠动物实验显
示，麦冬皂苷D降低血栓和抗感染的活性[5-~1。这些实验结果
有利于证明麦冬皂苷D是治疗心脑血管疾病的有效成分，
可作为控制川麦冬及其制剂的指标形成分。
由于皂苷为一类极性较大、结构复杂的化合物。无特征
紫外吸收，无专一显色剂，若采用紫外检测末端吸收法(200～
210 nm)，则灵敏度低。因此，笔者采用蒸发光散射检测器
(ELSD)作为检测手段，利用HPLC法测定川麦冬中麦冬皂
苷D的含量。在制备结晶的过程考察了在乙腈、95％乙醇、无
水乙醇、丙酮中的结晶效果，发现常温95％乙醇中结晶纯度
较高。晶形较好。
用上述方法对麦冬皂苷D进行提取、分离、纯化，其纯
度和含量等均符合含量测定用对照品的要求，该制备方法简
单可行，重现性好，不需特殊设备就可制得纯度98％以上的纯品，适于大规模制备，此法制得的对照品可作为控制川麦
冬及其制剂的指标性成分，具有较高的实用价值。
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