生物碱和黄酮是灯台叶的主要成分， 目前以 生物碱的研究比较深入，是灯台叶重要的活性物质。其中以鸭脚树叶碱(picrinine)的含量最高。 从云南、广西，以及越南、泰国、菲律宾、马来 西亚、澳大利亚等产地灯台叶中均分离得到过鸭 脚树叶碱，鸭脚树叶碱是台灯叶的标识性成 分 J。经过研究比较，我们研究建立了鸭脚树叶 碱对照品的制备方法，为灯台叶及其制剂质量标 准的提高研究打下了基础，现将其系统的制备和 检查分析方法报道如下。

 1 仪器和材料

 熔点用Yanaco显微熔点仪测定，温度未校正； 旋光用Jasco一20C旋光仪测定；IR用Bio—Rad FTS一135红外光谱仪测定，KBr压片；UV用岛津 uV一2450紫外光谱仪测定；MS用VG Auto Spec一 3000质谱仪测定；NMR用Bruker AM一400核磁共 振仪测定，TMS为内标。元素分析用VARIOEL 11I 全自动元素分析仪。

 HPLC分析用岛津LC一10Avp及安捷伦Angi— lent1 100液相色谱仪，分析柱用十八烷基键和硅胶 柱(Luna C一18和Purospher Star C一18，150mm× 4．6，5Ixm)。硅胶及硅胶G薄层板为青岛海洋化 工厂分厂产品，氧化铝为上海陆都化学试剂厂产 品，十八烷基键合硅胶为富士硅公司产品。葡聚 糖凝胶LH一20为Pharmacia公司出品。乙醇、氯仿、氨水、碘化铋钾等试剂用化学纯或分析纯试 剂，高效液相色谱流动相用色谱纯溶剂。

 灯台叶药材由昆明振华制药厂提供，产于云南 省思茅市，经郭文主任药师鉴定为夹竹桃科植物灯 台树Alstonia scholaris(L)R．Bro．的干燥叶片。

 2 提取分离

 2．1 提取

 干燥的灯台叶药材50kg切碎，分别加入8倍、 6倍水煮提二次，合并煮提液，减压浓缩为浸膏 (约7kg)。浸膏加水搅散后用浓氨水调pH为8， 氯仿萃取，萃取液加无水硫酸钠干燥，回收氯仿 后得浸膏372g。将其以5L甲醇热溶，加入适量粉 末活性碳回流脱色，趁热过滤，减压回收甲醇， 得灯台叶总生物碱258g(Fr—A)。

 2．2 分离

 Fr—A (总生物碱)100g用丙酮溶解后以适量 氧化铝拌样，再以3 000g氧化铝柱色谱分离，用 环己烷一乙酸乙酯溶剂系统梯度洗脱(100：0—100 ：50)，得含鸭脚树叶碱的部分35g(Fr—B)。Fr— B以硅胶柱色谱分离，用氯仿一甲醇溶剂系统梯度 洗脱(100：0～100：15)，得鸭脚树叶碱粗品约19g (Fr—c，浅黄色固体物)。Fr～c以十八烷基键合 硅胶柱色谱分离，用水一甲醇溶剂系统梯度洗脱 (100：50～100：70)，HPLC检查，合并纯度大于 95％ (峰面积归一法)的流份，得灰白色固体物 13g(Fr—D)，即为鸭脚树叶碱。

 2．3 纯化

 Fr—D以甲醇溶解后加0．65g粉末活性碳回流 脱色，趁热过滤，减压回收甲醇至适量体积，加 到葡聚糖凝胶LH一20柱色谱上，甲醇缓慢洗脱， HPLC检查，合并纯度大于95％的流份，减压回收 甲醇至适量体积，放置后析出微黄色的针晶7．3g。 该结晶用无水丙酮热溶，滤过，滤液滴加适量环 己烷，放置后析出无色针晶4．1g，即为鸭脚树叶 碱对照品。

 3 结构鉴定

 3．1 理化性质

 本品为无色的针状晶体(丙酮一环己烷)，易 溶于甲醇、氯仿、丙酮，可溶于乙酸乙酯、乙醇， 不溶于水和石油醚。易溶于2％ 稀盐酸及1％ 稀硫 酸，加碱中和后溶液变浑浊后复析出沉淀。熔点222—224c【=。比旋光度为[o【] 一48 (C 0．21， CHC1 )。元素分析：c 70．83％ ，H 6．67％ ，N 8．33％ ，O 14．17％ (计算值：c 71．0％ ，H 6．63％ ，N 8．28％ ，O 14．09％)。取本品适量，用 2％稀盐酸溶解制成约10mg／mL的溶液，各吸取 3mL置于三只试管内，分别滴加3—5滴改良碘化 铋钾、苦味酸、硅钨酸试液，上述试管中分别出 现橘红色、黄色、灰白色沉淀，呈现生物碱阳性 反应。

 3．2 光谱分析

 UVh (CH3OH) nm：205 (31693)，235．5 (10202)，287．5(4038)，提示其结构中有杂原子 取代的苯环，可能为二氢吲哚类化合物。IRv (KBr) cm～：3430，3391 (VS，NH)，3009 — 2866 (S，C —H)，1724 (S，C = O)，1610， 1481，1465 (S，C=C)，1203—1167 (S，C—O 及C—N)。提示该化合物结构中有胺基、苯环及 双键、酯基等官能团，属生物碱类化合物。

 正离子FAB MS m／z：339 [M +1] ，338 [M] ，239 。其中m／z339为基峰(100％)，是 该化合物吸收一个质子后呈现的准分子离子峰， m／z 338为分子离子峰，结合NMR光谱以及元素 分析数据，其对应的分子式应为c 。H N O。。其 NMR (CDC1 ，1×10 )测试数据以及相关分析 归属结果如表1，数据和文献报道 ]一致，确证 其结构为鸭脚树叶碱(picrinine)。

 4 纯度考察及含量标定

 4．1 薄层色谱分析(TLC)

 取本品溶于甲醇制成1—3mg／mL的溶液，定 量吸取相当于1，2，4，8，16，321~g的量，点于 同一硅胶G薄层板上，分别以环己烷一丙酮(5： 2，系统A，在双槽色谱缸中另槽用氨水饱和 15min，以下均同)、氯仿一甲醇(15：1，系统 B)、乙酸乙酯一丁酮(8：1，系统C)3种溶剂系 统展开，取出，晾干，分别用改良碘化铋试液、 10％ 的H2SO 一EtOH浸板显色。改良碘化铋试液 显色板(图2左)直接于13光下观察，10％H：SO 一EtOH显色板(图2右)于105c【=烘烤至斑点清 晰，再于13光下观察，均为单一斑点，未见其它 杂质斑点(图2)。

 4．2 高效液相色谱分析(HPLC)

 色谱柱用十八烷基键合硅胶为填充剂： 四氢 呋喃一0．01％ 三乙胺(35：65)为流动相，流速 1mL／min，柱温40℃ ；二维谱检测波长287nm，理 论塔板数按照鸭脚树叶碱峰计算应不低于5 000； 三维谱检测器用二极管阵列检测器(DAD)，在 190nm～400nm波长连续扫描。

 取鸭脚树叶碱适量，用液相色谱流动相溶解、 制成含量约为1ms／mL的供试溶液。使用时按需要 用流动相稀释。吸取供试液适量，注人液相色谱 仪。二维谱中鸭脚树叶碱按照面积归一化计算含 量为99．35％ (图3)。三维谱中除鸭脚树叶碱峰 外无任何吸收，鸭脚树叶碱峰纯度因数为999．878 (图4)。

 上述理化检识，薄层色谱(TLC)分析、高效 液相色谱(HPLC)分析检查、测定的结果证明，所制备的鸭脚树叶碱峰为单体化合物，纯度大于 98％ ，符合含量测定用中药质量标准用化学对照品的技术要求，可用于中药质量标准分析检验。

 5 稳定性考察

 将制备的对照品按照lOm#瓶分装于棕色玻璃 样品瓶，密封，外套纸盒。参照药品稳定性加速试 验的条件，将其置于40℃ 、相对湿度75％的条件下 (药品稳定性试验箱)，分别于0，1，2，3，6个月 取样进行外观、熔点测定、TLC、HPLC分析。结果 证明，鸭脚树叶碱对照品外观性状元变化；熔点未 变化；TLC检查未出现其它杂质斑点；HPLC未出 现其它物质峰，面积归一化计算纯度的变化(RSD = 0．37％)，单位进样质量的峰面积响应值(RSD= 1．29％)，均符合含量测定要求。提示鸭脚树叶碱对照品稳定l生较好，可以用于含量分析工作。

 6 结果与讨论

 针对中药所含的有效成分或标志性成分，建 立比较客观的定性鉴别和含量测定指标，提高和 完善中药质量标准，是中药现代化的主要标志之 一 。在此过程，很多质量分析工作经常因受制于 缺乏相应的化学成分对照品而难以开展，因此， 研究中药质量标准用化学对照品的制备分析方法， 是对中药现代化具有明确意义的应用基础研究。

 灯台叶是我省特色民族药，也是“云药”产 业发展的重点品种之一，目前已形成一定产业规 模，相关制剂产品均有专利和行政(中药保护品 种)的双重保护，进一步提高完善标准，开发系 列产品，是灯台叶类药品发展的重点，也是保持我省在灯台叶系列制剂方面技术及市场领先的重 点。我们研究建立了鸭脚树叶碱对照品的制备方 法，并为生产厂家和药品检验机构进行该品种的 质量研究提供了合格的对照品。该工作对于灯台 叶系列产品质量分析与控制，新产品开发等，均 有直接的促进作用。