1 仪器与材料

 岛津LC—lOATvp高效液相色谱仪(SPD— MlOAvp二极管阵列检测器、Class—vp色谱工作 站，日本岛津公司)，ARX一300核磁共振光谱仪 (TMS内标，瑞士Bruker公司)，日本Yanaco MP—S3熔点测定仪(未校正，广州实技科学仪器 有限公司)，ZF—I型三用紫外分析仪(上海顾村 电光仪器厂)。

 A B一8大孑L树脂(天津农药厂)，聚酰胺(柱色谱用)、聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化 塑料厂)，Sephadex LH一20(北京慧德易科技责任 有限公司)，HPLC所用乙腈和甲醇为色谱纯(天 津市康科德科技有限公司)，水为娃哈哈饮用纯净 水(杭州娃哈哈集团有限公司)，其他试剂均为分 析纯。

 蒲黄药材采于内蒙古自治区乌拉特前旗乌梁 素海，由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为Typha angustifolia L．的花粉。

 2 方法与结果

 2．1 制备工艺

 取蒲黄1 kg，经质量分数为70％的乙醇溶液 加热回流提取3次，每次3 h，合并滤液，减压回收 乙醇，得总浸膏(800 g)。取600 g浸膏经大孔树 脂AB一8柱色谱，用乙醇一水系统梯度冼脱，分别 收集质量分数为70％和90％的乙醇溶液洗脱部 分。质量分数为70％ 的乙醇溶液部分经聚酰胺 柱色谱，乙醇一水系统梯度洗脱，分别合并水和质 量分数为30％的乙醇溶液洗脱部分，各部分再经 反复聚酰胺柱色谱，三氯甲烷一甲醇梯度洗脱，以 及Sephadex LH一20柱色谱，甲醇洗脱，得到淡黄 色针晶1(200 mg)和淡黄色针晶2(280 mg)。质 量分数为90％ 的乙醇溶液洗脱部分经反复聚酰 胺柱色谱和SephadexLH一20柱色谱，得白色针晶3(70 rag)。另取200 g浸膏，用质量分数为 10％的盐酸溶液200 mL使溶解，水浴中水解 2 h，放冷，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回 收乙酸乙酯，得浸膏，经反复聚酰胺柱色谱，三氯 甲烷一甲醇洗脱，及Sephadex—LH20柱色谱，得 黄色无定形粉末4(8O rag)。

 2．2 结构鉴定

 2．2．1 香蒲新苷(1)

 淡黄色针晶(甲醇)，mp 148～150℃ 。喷三 氯化铝一乙醇溶液置紫外灯365 nm 下检视显黄 色荧光，Molish反应阳性，酸水解检出鼠李糖和葡 萄糖，结合 C-NMR谱中8 177．2羰基碳信号，推 测该化合物为黄酮苷类化合物。将该化合物与文 献[3]中报道的香蒲新苷的 H—NMR和 C-NMR 谱数据对照，基本一致，故鉴定该化合物为香蒲新 苷。 H-NMR(300 MHZ，DMSO—d6) ：7．85(H一 2 )、7．48( 6 )、6．90(H～5 )、6．42(H一8)、6．19 (I-I一6)、5．62(H--1 )、5．02(H一1 )、4．37(H一1 )、 3．85(OCH3)、0．96(H一6 )、0．70(H一6 )。 H-NMR(75 MHZ，DMSO—d6) ：177．2(C一4)、 164．3(C一7)、161．3(C一5)、156．5(C一9)、156．5(C一 2)、149．4(C一3 )、146．9((>_4 )、132．5(C一3)、 122．2(C-6 )、121．1( 1 )、115．3(C-2 )、113．3 (C-5 )、104．1(()_10)、101．0(C 1 )、101．0(C一 1 )、98．8(C一6)、98．8(C一1 )、93．9(C一8)、77．6 (C一2 )、77．1(CH3 )、75．9(C一5 )、71．8(C-4 )、 71．8((>_4 )、71．8((>_4 )、70．6((>_2 )、70．6(C一 3 )、70．6((>_2 )、70．6(C一3 )、68．4((>_5 )、 68．4(C一5 )、66．9(C一6 )、55．7(OCH3)、17．8((>_ 6 )、17．2(C一6 )。

 2．2．2 异鼠李素一3一O一新橙皮苷(2)

 淡黄色针晶(甲醇)，mp184～185℃ 。喷三 氯化铝一乙醇溶液置紫外灯365 nm下检视显黄色 荧光，Molish反应阳性，酸水解检出鼠李糖和葡萄 糖，结合 C-NMR谱中8177．2羰基碳信号，推测 该化合物为黄酮苷类化合物。将该化合物与文献 [3]中报道的异鼠李素一3一O一新橙皮苷的 H-NMR和 C-NMR谱数据对照，基本一致，故 鉴定该化合物为异鼠李素一3一O一新橙皮苷。 H—NMR 。C-NMR(300 MHZ，DMSO—d6) ： 7．96( 2，)、7．48( 6，)、6．90( 5，)、6．39( 8)、6．16(H一6)、5．77(H一1 )、5．02 (H一1 )。 C—NMR(75 M I．-IZ ， DMSO 一d 6) ： 177 ．2 (C 一4 )、 161．2(C一5)、161．2(C一7)、156．5(C-2)、155．9(C～9)、149．4(C一3 )、146．9(C一4 )、132．5(C一3)、 121．8(C-6，)、121．1((>_1 )、115．2(C-2 )、113．5 ( 5 )、103．7(C一10)、100．8( 1 )、99．0(C一 1 )、98．4(C-6)、93．9( 8)、77．4(C一2 )、77．2 (C-3 )、77．2(C一5 )、70．6(C一2 )、71．8(C一4 )、 70．6( 4 )、70．2(C一3 )、68．3( 5 )、60．6(C一 6 )、55．7(OCH3)、17．O(C一6 )。

 2．2．3 柚皮素(3)

 白色针晶(甲醇)，mp 254～256℃，分子式 C15 H12 O5。喷三氯化铝～乙醇溶液置紫外灯 365 nm下检视显蓝色荧光。推测该化合物为黄 酮类化合物。将该化合物与文献[4]中报道的柚 皮素的 H—NMR和 C-NMR谱数据对照，基本一 致，故鉴定该化合物为柚皮素。 H—NMR(300 MHZ，DMSO—d6) ：12．14(5—0H)、10．76(7一 OI-I)、9．56(4 OH)、7．31(H一6 )、6．78(H一3 )、 6．78(I-I一5 )、5．88(H一6)、5．88(H一8)、5．44(H一 2)、3．21、2．65(H一3)。"C—NMR(75 MHZ，DM— SO-d6) ：196．4(C一4)、166．7(C一7)、163．5(C一 5)、163．0(C-9)、157．8( 4 )、128．9(C一1 )、 128．4(C一2 )、115．2(C一3 )、101．8((>_10)、95．8 (C一6)、95．0( 8)、78．5( 2)、42．0( 3)。

 2．2．4 异鼠李素(4)

 黄色无定形粉末(甲醇)，mp 304～305℃ ，分 子式C16H12 O7。喷三氯化铝一乙醇溶液置紫外 灯365 nm下检视显绿色荧光。结合 C-NMR谱 中6 175．9羰基碳信号，推测该化合物为黄酮类 化合物。将该化合物与文献[5]中报道的异鼠李 素的 H—NMR和 C-NMR谱数据对照，基本一 致，故鉴定该化合物为异鼠李素。 H—NMR (3OO MHZ，DMSO—d6) ：7．76(H一2 )、7．69(H一 5 )、6．95(H一5 )、6．48(H一8)、6．20(H一6)、3．85 (OCH3)。¨C-NMR(75 MHZ，DMS0一d6) ： 175．9(()_4)、164．0(()-7)、160．7(C一5)、148．9(C一 3 )、147．4(C-2)、147．4(C-9)、146．7(C一4 )、 135．9(C-3)、122．0(C-6 )、121．8(()_1 )、115．6 (C-2 )、103．1(C一10)、98．3((>_6)、93．6(()-8)、 55．8(OCH3)。

 2．3 纯度检查

 2．3．1 薄层色谱法

 分别精密称取化合物1、2、3和4各1．0 mg， 加甲醇使溶解并稀释至1 mL，摇匀，作为供试品 溶液，每个供试品选3个不同展开系统，梯度点 样，分别采用下列薄层色谱条件：聚酰胺薄膜以三氯甲烷一甲醇(体积比为4：1)、质量分数为50％、 70％和90％ 的乙醇溶液展开，喷三氯化铝一乙醇 溶液，置紫外灯365 nm下检视；硅胶GF254板， 以乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水(体积比为5：3：1：1)、 石油醚一乙酸乙酯(体积比为1：1)、石油醚一乙酸 乙酯一甲酸(体积比为5：2：1)展开，置紫外灯 254 nm下检视，显暗斑，喷质量分数为10％的硫 酸乙醇溶液，105℃ 加热显色，显黄色斑点。

 结果表明，香蒲新苷(1)、异鼠李素一3一O一新橙 皮苷(2)、柚皮素(3)和异鼠李素(4)分别用3个不 同的展开系统展开，经检视，均无明显杂质斑点。

 2．3．2 HPLC法

 色谱条件：色谱柱为Chromasil C】8(200 l’lqln×

 4．6 l’lqln，5 m)，流动相为乙腈一体积分数为0．05％ 的磷酸水溶液(体积比为13：87)(供化合物1，2纯 度检查)，甲醇一水(体积比为60：40)(供化合物3和 4纯度检查)，流速为0．8 mL·min～。检测波长为 254 niT1。

 称取化合物1、2、3和4各1．0 mg，加甲醇使 溶解并稀释至10 mL，摇匀，进样5 L，记录色谱 图时间为主峰的保留时间的2倍。测定结果根据 面积归一化法而得，香蒲新苷(1)和异鼠李素一3一 O一新橙皮苷(2)、柚皮素(3)和异鼠李素(4)的纯 度分别为：99．2％，99．7％，98．0％和96．2％，色 谱图见图1。

 3 讨论

 本文作者用柱色谱手段建立的从蒲黄中制备 香蒲新苷、异鼠李素一3一O一新橙皮苷、柚皮素和异 鼠李素对照品的方法其纯度符合鉴别和含量测定 用对照品要求，可用于蒲黄的质量控制。虽然 2005版《中华人民共和国药典》无柚皮素的质量 控制，但实验中发现蒲黄中含有大量的柚皮素，可 以作为一个指标性成分，对蒲黄进行质量控制。

 异鼠李素在蒲黄中含量有限，而2005版《中 华人民共和国药典>蒲黄的鉴别项下仍以异鼠李 素为对照品，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸(体积比为5： 2：1)为展开系统，置紫外灯(254 nm)下检视，对 蒲黄进行质量控制，有待商榷。本文作者考虑到 蒲黄中多数苷类其苷元为异鼠李素。所以采用水解方法制备异鼠李素。