| 云威灵为菊科植物Inula艄 Wal1．ex DC的干燥根 及根茎，具有祛风除湿、通络止痛、健胃消食等功能，用于 风湿痹痛、肢体麻木、腰膝酸软、屈伸不利、腹脘冷痛、食 积腹胀 。我们经过研究后确认其抗风湿痹病的有效部分为 挥发油，称为云威灵油_4]。云威灵挥发油中含有约5O种化学 成分[4‘ ，主要含有百里香酚(thymo1)、异丁酸百里香酯 (thymyl iso-butyrate)、枯茗醛(cumaldehyde)、桉叶素(cine— ole)、桉醇(~budesrno1)、檀香烯(santalen)、没药烯(~-bis— abolene)和异戊酸百里香酯(thymyl iso-vaierate)等一系列具 有镇痛、镇静、解热、抗炎、抗菌作用的活性成分。采用GC 法测得云威灵挥发油中含量最高的2个活性成分为百里香酚 (thymo1)和异丁酸百里香酯(thymyl iso-butyrate)，这两种成 分的含量占云威灵挥发油总量的7o ～8o 。而市场上无异 丁酸百里香酯对照品的出售，限制了对云威灵药材质量评价 及对其进一步的开发与研究。本实验运用硅胶柱色谱分离、 减压蒸馏等方法进行分离纯化，制备异丁酸百里香酯对照品， 为云威灵药材及中药五类新药云威灵软胶囊提供标准物质。
1 仪器与试剂
GC-920型气相色谱仪(山东鲁南产)。柱色谱及薄层色 谱用硅胶G (青岛海洋化工厂分厂)，柱层析硅胶(100~200 目)，所用试剂均为分析纯。
云威灵药材(云南)经鉴定为菊科植物显脉旋覆花Inulancr’uosa Wal1．ex DC 的干燥根及茎。
2 方法与结果
2．1 挥发油的提取
云威灵药材220 粉碎成4～8 Hm颗粒，加lO倍量水， 水蒸气蒸馏6 h，经油水分离器分出油层，加无水硫酸钠脱 水，滤过，即得，制成约1 000 g。
2．2 化合物的分离
2．2．1 异丁酸百里香酯粗品的分离 柱层析硅胶于石油醚 中湿法上柱，云威灵油100 g干法上样，石油醚一乙酸乙酯一无 水乙醇梯度洗脱，200 mL为一流份，共收集51个流份。各 流份硅胶G薄层板检识，展开剂石油醚(6o～90。C)一乙酸 乙酯(10：0．5)，显色剂为5％香革醛硫酸溶液。流份5到流 份9含有异丁酸百里香酯的黄色斑点，合并，减压回收溶剂， 得挥发眭黄色油状液体，即异丁酸百里香酯的粗品。
2．2．2 异丁酸百里香酯的精制 采用反复减压精馏的方法 对上述异丁酸百里香酯的粗品进行分离(负压为0．1 Mpa， 砂浴温度152~155℃)，反复操作3～4次，逐步提高流份中 异丁酸百里香酯的含量，直至用GC法测定馏分中异丁酸百 里香酯的含量达98 以上，即得。异丁酸百里香酯为无色、 芳香透明的液体，2～4。C低温密闭保存。
2．3 结构确定
异丁酸百里香酯为无色液体，具有芳香气味，沸点约为250℃，折光率为1．178 2，易溶于丙酮、乙腈。UV E腈 255 nin和269 nlTl有最大紫外吸收，表明有芳环的存在。 IR 2 938、2 934、2 874 cm一：cH 的伸展振动，1 430 cm一：CH 的弯曲振动，提示结构中有-CH；1 758、1 230、1 150 cm_。：酯基的伸展振动，提示结构中有酯基；1 621、1 506、1 468 cm一：苯环的C—C振动，提示结构中 有苯环；1 057、910、815 cm一：苯环取代的CH的弯曲振 动，提示结构中苯环有取代基。”@NMR核磁共振谱(500 MHz，溶剂：cDCl。，内标：TMS)中有12个碳信号，其 中艿22．94和19．02为重叠碳信号，艿175．75为羰基碳信号 (c o)，8 147．99为和氧原子相连的碳信号(c 2)，艿136．99 和136．50为苯环和烃基相连的碳信号(C9)，艿122．67为苯 环上的碳信号(c1)，艿126．25为苯环上的碳信号(C2)，艿 126．94为苯环上的碳信号(C3)，艿34．28为苯环相连的次 甲基上的碳信号( )，艿20．82为苯环相连甲基的碳信号 (C4)，8 22．94为苯环相连的异丙基的碳信号(C8)，艿 19．02为苯环相连酯基上的异丙基的碳信号(C6)，艿19．02 为苯环相连酯基上的次甲基上的碳信号( )。1H—NMR (DMSO，艿 )6．78(1H ，s)为一单峰，提示为=CH—c =；7．00(1H ，d)为一单峰，提示为⋯CH C ；7．20 (1H ，d)为一单峰，提示为一CH—C=；2．31(3H ，s) 为一单峰，提示为一CH—C；2．83(1H，d)为七重峰，提 示为一CH (CH。)2；2．96(1H，d)为七重峰，提示为一OC— CH (CH3)2；1．33(6H，d)为双峰，提示为CH (CH3)2。 MS：FAB源，测定数据表1。
FAB-MS测得分子离子峰为220，与其分子式C1 H1s 02 相符。
2．4 定性鉴定及定量鉴定
2．4．1 薄层色谱法 取异丁酸百里香酯加丙酮制成1 mg· mL 的溶液，作为供试品溶液照薄层色谱法(中国药典 2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液6止，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)一乙酸 乙酯(10：0．5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 香草醛硫酸溶液，在120℃加热至斑点显色清晰。供试品色 谱为一个显橙红色颜色的斑点。
2．4．2 气相色谱法 色谱条件与系统适用性试验100％ DIMETHYL POLYSIL0XANE石英毛细管柱，30 rfl／n× 0．25 n2fl，5 gin；柱温：160℃，汽化温度：220。C，检测 温度：200℃。氮气柱前压：6磅／平方英寸，进样量：0．3 ， 分流比：50：l，理论塔板数按异丁酸百里香酯峰计算 应≥10 000。在不同色谱条件下异丁酸百里香酯对照品均为 一个主峰，改变柱温及氮气流速未见异常峰，用面积归一法计算其纯度>98 ，见图1。
3 讨论
云威灵挥发油中含有多种活性成分，其中含量较高的百 里香酚(thymo1)、异丁酸百里香酯(thymyl iso-butyrate)， 具有镇痛、抗炎及很强的抑杀细菌、真菌的作用，且毒性 低，用上述制备方法进行提取、分离、纯化、操作简便，重 现性好，符合对照品的纯度要求。可供云威灵药材及中药5 类新药云威灵软胶囊定性及定量使用的对照品。
硅胶柱色谱分离得到的异丁酸百里香酯粗品含有多种杂 质，因考虑其挥发性，故采用反复减压精馏的方法得到纯度 达98 以上的无色液体。 |
