| 新疆紫草Arnebia euchroma为紫草科Boraginaceae多年生草 本植物，以根入药。紫草，始载于《神农本草经》，列为中品。味 苦，性寒。有凉血、活血、解毒透疹之功效⋯ 。以往研究表明紫 草具有抗病原微生物、抗炎及抗过敏、抗生育、解热、抗肿瘤、保 肝、止血、降血糖、镇静和影响免疫功能等作用 。现代药理学 研究证明，紫草丙酮水提取物具有抗HIV活性 。紫草主要含 两类有效成分：一为脂溶性的萘醌类，二为水溶性的多糖、酚酸 类 J。咖啡酸四聚体(cafeic acid tetramers CAT)为紫草中重要 的水溶性有效成分之一，在《中国药典》中还未收载，据报道，咖 啡酸四聚体单钠和单钾盐具有明显的抗HIV活性 。我们从紫 草中分离得到了咖啡酸四聚体(结构式见图4)，经紫外光谱 (uV)、红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)和质谱(MS)分析，其相 关数据与文献 J一致，纯度为98．1l％ ，符合中药化学对照品含 量测定要求，可作为紫草质量控制的化学对照品。分离制备紫草 水溶性活性成分对进一步揭示紫草药效的物质基础和开发新的天然药物具有十分重要的意义。
1 仪器与试药
Waters液相色谱仪(包括W600输液泵、W717自动进样器、 W2996PDA检测器和脱气装置)；INOVA一400核磁共振仪；Agi— lent LC／’MS DSL质谱仪；DK一$26型电热恒温水浴锅(上海精密 实验设备有限公司)；RE一52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器 厂)：MCL—GEL CHP20P(日本三菱公司)；ODS—AC18(日本三 菱公司)；Sephadex LH一20(日本三菱公司)；反相薄层层析板 (Merch RP～F254S)。
实验用植物为新疆软紫草的干燥根，购于新疆参茸药业有限 公司(批号：20050102)，品种鉴定由新疆医科大学药学院生药／ 天然药物化学教研室帕丽达副教授完成。高效液相用甲醇(色 谱纯)，丙酮、正己烷、醋酸乙酯、正丁醇、甲醇、甲酸为分析纯。
2 方法
2．1 咖啡酸四聚体的分离和提取采自新疆地区的新疆软紫草 干燥根10 kg，粉碎，用正己烷回流提取3次，合并、回收正己烷， 得到沉红色粘稠物。将紫草正己烷提取后的药渣，用70％丙酮 回流提取3次，合并、回收丙酮，得水溶液层。浓缩水溶液层后， 得到的提取物，依次用醋酸乙酯、正丁醇萃取。剩余的水层浓缩、 冷冻干燥，得紫黑色粘稠膏状物240 g。将其依次用MCL—GEL CHP20P，Sephadex LH一20上分离后，再在ODS—ACI 8上，用不同 浓度的甲醇水溶液梯度洗脱，分离得黄褐色粉末，即为待测样品。
2．2 纯度检查和含量测定
2．2．i 薄层色谱法反相薄层层析板(Merch RP～l8F 5× 7．5)精制的CAT用重蒸水溶解，用毛细管在反相薄层层析板点 样，自然晾干后，放入3种展开系统中展开。3种展开系统按体 积配制，乙腈一水(2：8)；乙腈一水(3：8)；乙腈一甲醇·水(1：1： 8)，取出晾干后在UV254 nm下观察斑点，供试品只有一个主斑 点，比移值Rf分别为：0．756，0．675，0．805。见图l。
2．2．2 高效液相色谱法色谱条件：色谱柱Water Symmatry C 8 150 cm×4．6 mm；流动相：甲醇-0．14甲酸水(29：71)；检测波长 252 nm；流速：l mVmin；柱温：40qC。
精密称取咖啡酸四聚体，用甲醇配成浓度为0．22 mg／ml的 样品溶液，均进样l0 ，样品显示为单峰，用归一化法计算含量 为98．1l％(保留时间为14．656 min)。见图2。
2．2．3 二极管阵列检测器(PDA)纯度检查法该实验所用仪器 为Waters液相色谱仪，W2996PDA检测器。在“2．2．2”项中色谱 条件下，200～400 nm用PDA检测器记录色谱图，检查主成分峰 的纯度。见图3。
3 结果
3．1 对照品的纯度检查色谱图见图2，结果表明，在供试品溶 液的色谱图中，除溶剂峰外，各杂质峰面积总和小于样品溶液主 峰的面积(0．5％)。二极管阵列检测器的测定结果表明：主成分 峰的纯度因子为985．985；五点光谱图完全重合，表明主成分峰 为单一物质峰。
3．2 结构确认 定性鉴别样品与三氯化铁乙醇溶液显色，阳 性，提示结构中有酚羟基，溴钾酚蓝乙醇液原位薄层显色，结果提示化合物为有机酸的盐。
紫外光谱样品的水溶液在252nm处有最大吸收。
IR光谱中盯 3388 cm (OH)，1680 cm (H—C=0)， 1588 cm (C=C)。
核磁共振 H NMR见表l。核磁共振”C NMR见表2
质谱分子离子峰(m／z717[M—H] )，与分子式C3 H，。0 相符。
以上uV，IR，NMR，MS光谱数据与文献报道值一致，确定该 样品为咖啡酸四聚体，其纯度符合国家中药对照品纯度要求。
4 讨论
作为新疆紫草中的水溶性成分之一，咖啡酸四聚体的提取、 分离、纯化及物理化学常数的测定，未见国内文献报道。本实验 从紫草的丙酮水提取物中制备咖啡酸四聚体，纯度较高，方法成 熟，可作为常规的制备方法。同时由于中药所含成分复杂，增加 了提取、分离纯化的难度，尤其是水溶性成分的分离，有时结果的 重复性较差。可采用适当的梯度洗脱方法可以解决. |
