1 仪器、试药与样品

 Waters600—2487高效液相色谱仪(美国)； Agilent 6890气相色谱仪；岛津UV-250紫外分光 光度计(日本岛津)；NICOI ET MX-1E FT-IR红 外光谱仪(美国尼高力)；VG7O7OE质谱仪(英国 VG)；Bruker AV-600型高分辨核磁共振仪(德国 布鲁克)。柱层析用硅胶(200~300目，青岛海洋 化工厂)。

 阿魏药材[来源于新疆维吾尔自治区中药民族 药研究所，经该所鉴定为新疆阿魏(FeruLa sinkiangensis K．M．Shen)的树脂]。甲醇为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

 2 方法与结果

 2．1 分离纯化

 2．1．1 生药的提取与分离

 取阿魏，提取挥发油，取阿魏挥发油适量，用 少许乙醚稀释后与硅胶拌匀，挥干乙醚后，用正己 烷洗脱，进行硅胶柱层析分离。以20mL为一流 分，收集含量高于85 的流分(通过2．2气相色 谱法测定)，合并，回收正己烷，得仲丁基一1一丙烯 基二硫化物的粗品。

 2．1．2 RP_HPLC分离纯化

 液相色谱分离条件：Spherisord SIO ODS2 (10mmX250m)制备柱；流动相为甲醇一水(70： 30)；流速为5mL·min- ；检测波长为227nm。

 将仲丁基一1一丙烯基二硫化物粗品用甲醇溶解， 离心，滤过，用半制备液相色谱仪进行制备。收集 顺反仲丁基-1-丙烯基二硫化物峰，将收集液用正 己烷萃取，合并正己烷层，挥干正己烷得淡黄色液 体，即顺反仲丁基-1-丙烯基二硫化物纯品。液相 制备色谱图见图1。

 2．2 纯度检查

 2．2．1 薄层色谱法

 将顺反仲丁基-1-丙烯基二硫化物纯品用正己 烷制成每1mL约含lOmg仲丁基一1一丙烯基二硫化 物的溶液。分别吸取5 L和10／,L上述样品点于同 一含羧甲基纤维素钠硅胶G薄层板上，用三个展 开系统展开：a正己烷；b石油醚(30～60℃)；C 正己烷一乙醚(19：1)，取出，晾干。用碘蒸气显 色。结果除了主斑点外没有杂质斑点。薄层色谱图 见图2。

 2．2．2 气相色谱法

 将顺反仲丁基一1一丙烯基二硫化物混合体的纯 品用正己烷制成每1mL约含10mg仲丁基-1-丙烯 基二硫化物的溶液。色谱条件：HP—INNOWAX mfilm (0．53mm× 30m，1．0f,m)毛细管柱。柱温：起始温度90℃，保持15分钟；以每分钟4~C 的速度升至180。C，保持5分钟；再以每分钟10℃ 的速度升至220。C，保持10分钟。载气：N。；流 速：3mI ·rain- 。检测器：氢火焰离子化检测器 (FID)。进样器和检测器温度均为230。C；氢气： 30mI ·min ； 空气：350mL ·mirr ；Makeup (N。)：25mL·rain- 。用峰面积归一化法计算含 量，结果顺反仲丁基-1-丙烯基二硫化物混合体纯 品含量之和为99．1 。气相色谱图见图3。

 2．3 结构鉴定

 2．3．1 紫外光谱法

 紫外光谱中，最大吸收峰在227nm处，对应 了C=C在紫外区的特征吸收。

 2．3．2 红外光谱法

 根据液膜法得到的红外光谱图分析， 波数 1611．1为烯烃基特征伸缩振动，波数933．9为反 式烯烃基特征伸缩振动，波数670．6为顺式烯烃基 的特征伸缩振动。图谱见图4。

 2．3．3 质谱法

 分子离子峰rn／z162(53．38 )，二硫化物同位 素峰m／z164(5．76 )，其他各离子碎片均能合理 解释，与仲丁基丙烯基二硫化物的结构式相符。

 2．3．4 核磁共振法

 以CDCl。为溶剂，TMS为内标，进行核磁共 振氢谱和碳谱鉴定。 H—NMR： 0．98(3H，t，J 一7．4Hz，H一7)；61．36 (3H，d，J一6．9Hz，H一 5)； 61．69， 1．54 (2H． ITI， H一6)； 62．79 (1H ， m，H一4)。顺式： 5．63(1H，in，H一2)；66．07 (1H，m，Jl一9．4Hz，H 3)。反式：65．91(1H， ITI，H-2)； 6．02 (1H，m，Jl一14．7Hz，H一3)。

 氢谱中共计有l4个质子，与仲丁基一丙烯基二 硫化物分子式C H S 的氢数目相符。

 氢谱的低场区出现有顺式及反式双键氢的信 号：66．07 (1H，m，J1===9．4Hz，顺式)， 6．02 (1H，m，J 一14．7Hz，反式)。因此判断该样品 为仲丁基丙烯基二硫化物的顺、反混合物即为仲丁 基一顺式一丙烯基二硫化物和仲丁基一反式一丙烯基二 硫化物的混合物。二 的比例约为1：3．5。

 — NMR谱上出现有顺式及反式仲丁基一丙烯 基二硫化物的两组共14个碳信号。其中．顺式结 构的7个碳中有3个( H。，1个CH2，3个CH； 反式结构的7个碳中有3个CH。，1个CH2，3个 CH与仲丁基一丙烯基二硫化物的分子式C H S。 吻合。 C-NMR：顺式l4．2(q，C一1)，125．9(d， C一2)， 131．3 (d， C一3)， 48．4 (d， C一4)， 2O．0 (q，C一5)，28．7(t，C一6)，l1．5(q，C-7)。反式 18．0 (q，C一1)， 128．6 (d， C 2)， 126．9 (d， C_ 3)， 47．9 (d， C-4)， 20．1 (q， C～5)， 28．8 (t， C-6)， l1．511．5 (q，C 7)。

 3 结果与讨论

 上述该制备方法对顺反仲丁基一1一丙烯基二硫 化物混合体进行分离纯化，通过TI C及GC法测 定，其纯度大于99．O ，收率为65 左右，均符 合新药审批办法规定对照品的要求，因而可以作为 对照品使用。该方法简单可行，产品纯度高，具有 较大的实用价值。