1 仪器与材料

 1．1 仪器Waters 2695高效液相色谱仪，2487紫

 外检测器；GR202电子分析天平，精度0．01 mg；元 素分析仪；Bruker Tensor27型傅立叶变换红外分光 光度计；787 KF Titrino卡氏水分测定仪；DHG一 9240 A型电热恒温鼓风干燥箱；CWF11／5型高温 炉；YMC 250×4．6 mm色谱柱。

 1．2 试药 对照品原料(盐酸头孢噻呋精制原 料)，由山东齐鲁药厂提供；头孢噻呋钠原料来自其 他生产企业；头孢噻呋试剂(批号：80370—57—6， 公司提供纯度：99．5％)，购自Sigma—aldrich公司； 原研发企业头孢噻呋工作对照品，由辉瑞公司提 供。乙腈、三氟乙酸均为色谱纯；水为超纯水；醋酸 铵、冰醋酸、四丁基氢氧化铵、四氢呋喃为分析纯。

 2 方法

 2．1 原料筛选稳定性研究按农业部颁布的原料药稳定性试验技术规范¨ 要求进行加速试验，用高 效液相色谱法【2 测定有关物质含量的变化。

 2．1．1 色谱条件 流动相A：水一乙腈一三氟醋 酸(950：50：1)；流动相B：水一乙腈一三氟醋酸 (200：800：1)，梯度洗脱程序如表1所示。检测波 长为254 nm。

 2．1．2 供试液制备取供试品，用流动相稀释制 成每1 mL中含头孢噻呋0．3 mg的溶液，进样量 20 。按峰面积归一化法计算杂质总含量。

 2．2 结构确证

 2．2．1 元素分析委托中国科学院化学研究所进 行元素分析。

 2．2．2 红外光谱测定用KBr压片法进行红外光 谱分析 j

 2．2．3 高效液相色谱测定

 2．2．3．1 液相色谱条件以醋酸铵溶液(取醋酸 铵3．85 g，加10％ 四丁基氢氧化铵13．5 mL，加水 至700 mL，用冰醋酸调节pH值至6．6—6．8)一甲 醇一四氢呋喃(700：200：110)为流动相；检测波长为254 rim。

 2．2．3．2 供试液制备取本品适量，精密称定，加 流动相溶解并稀释至每1 mL中约含头孢噻呋 0．1 mg的溶液，立即精密量取20 ，注入液相色谱 仪，记录色谱图；另取辉瑞公司提供的原始基准物 质，同法测定。

 2．3 纯度测定采用3种高效液相色谱法，均按 峰面积归一化法计算杂质总含量。

 2．3．1 方法1 同稳定性试验方法。

 2．3．2 方法2 同2．2．3项结构确证方法，制备5 份供试品溶液，每份溶液进针2次。

 2．3．3 方法3 采用Sigma—aldrich公司提供的头 孢噻呋试剂的纯度测定方法(HPLC法)。

 2．3．3．1 液相色谱条件流动相为乙腈一水一磷 酸(80：20：0．04)，检测波长为250 am。

 2．3．3．2 供试液制备取供试品，用流动相稀释 制成每1 mL中含头孢噻呋0．3 mg的溶液，进样量 为2O L。

 2．4 对照品原料的质量检验和标定

 2．4．1 干燥失重按《中国兽药典》干燥失重方 法，105~C干燥至恒重 。

 2．4．2 炽灼残渣按《中国兽药典》炽灼残渣方法 测定 。

 2．4．3 含量测定和赋值高效液相色谱法(2．2．3 项)。

 3 测定结果

 3．1 稳定性试验结果结果如表2所示。

 盐酸头孢噻呋经加速试验，杂质含量最高为 5．3％ ，而头孢噻呋钠加速试验后杂质含量最高达 到i0．5％。可见盐酸头孢噻呋比头孢噻呋钠稳定， 确定为对照品原料。

 3．2 结构确证结果

 3．2．1 元素分析测得各元素含量为：cl：5．73％， N：11．24％ ，C：37．43％ ，H：3．32％ 。

 3．2．2 对照品原料的红外光谱图与辉瑞的原始基 准物质的红外光谱图完全一致(图1)。

 3．2．3 经高效液相色谱法测定，供试品溶液主峰 的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

 3种结构确证方法确证了所用原料为盐酸头孢 噻呋。

 3．3 纯度测定结果

 3．3．1 方法1 测得总杂质含量为3．3％ ，纯度为 96．8％(3．1项)。

 3．3．2 方法2 平均纯度为96．3％，具体测定结果如表3所示。

 同时测定Sigma—aldrich公司提供的头孢噻呋 试剂，测定纯度为94．7％ ，与提供结果相差较大。

 3．3．3 方法3 测得中国兽医药品监察所对照品纯度为99．1％ ，Sigma—aldrich试剂纯度为99．9％ ， 结果偏高。

 3种纯度测定方法比较，方法1和方法2均可 行，方法3误差太大。

 3．4 对照品原料的质量检验和标定结果

 3．4．1 水分测定分装后的对照品水分为3．1％。

 3．4．2 干燥失重 分装后的对照品干燥失重为 3．5％ 。

 3．4．3 炽灼残渣炽灼残渣的结果为0．3％。

 3．4．4 含量测定结果

 3．4．4．1 用辉瑞公司提供的原始基准物质作比对， 由2人测定，每人5个以上数据，用外标法测得中国 兽医药品监察所对照品的含量结果如表4所示，并 按加权平均进行统计计算。经加权平均统计计算， 按湿品计，含头孢噻呋c。 H， N 0，S，为87．5％。3．4．4．2 根据WHO对照品定值原则 ，在无溯源 对照品的计算下，计算一种对照品的含量是100％ 减去干燥失重的含量，减去无机杂质(炽灼残渣的 量)，再乘以所测定的纯度含量，作为该批对照品的 含量。计算得盐酸头孢噻呋含量为92．6％ ，再按元 素分析测得的氯含量，折算成头孢噻呋的含量为 87．4％。与选用原始研发厂作为含量对照测得的 结果一致。

 4 讨论

 4．1 稳定性试验的结果说明，头孢噻呋钠对温度、 光照都比较敏感，比较容易降解，而盐酸头孢噻呋 虽对光照比较敏感，但对温度不敏感，有关物质含 量变化较小。盐酸头孢噻呋比头孢噻呋钠更稳定， 适合作对照品原料，试验结果也为我们提供了对照品的分装、贮存依据，说明对照品分装容器应避光。

 4．2 用纯度测定方法3得到的头孢噻呋和各杂质 峰的分离效果不好，且所测纯度远大于方法2所测 的结果，这是由于杂质与主成分没有分开造成的， 所以Sigma—aldrich公司所提供的试剂纯度值与实 际误差较大。国内各企业用该公司的试剂作对照 品必定会造成产品实际含量与测定值误差较大，对 产品质量造成一定影响。另外2种液相测定方法能将头孢噻呋和各杂质峰完全分离开，测定纯度结 果准确，二者均可行，且由于方法2噪音小，因此更 优于方法1。

 4．3 本文按照国家对照品的研制原则，选用合适 的方法从原料筛选、结构确证、纯度测定和其他质 量检验上对头孢噻呋对照品的质量进行了严格控 制，并采用辉瑞公司提供的企业对照品作为溯源对 照品，测定的结果与根据WHO对照品赋值原则计 算所得的对照品的含量结果比较，相对偏差为 0．06％。因此，根据原始对照品定值标准和以原始 研发厂为溯源两种方法来赋值，结果完全一致。最 后在对照品赋值时采用了第一种方法的结果。