| 当前位置 : 首 页 >> 中药对照品 >> 正文阅读 |
 |
| 沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定 |
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R．Br．干
燥成熟的种子0 ，能温补肝肾、固精、缩尿、明目，用于治疗肾虚
腰痛，遗精早泄，白浊带下，小便余沥，眩晕目昏；始载于《图经本
草》，名为白蒺藜。
沙苑子主要含有黄酮类、三萜类、有机酸类、氨基酸等。黄酮
类成分是沙苑子的主要有效成分，具有许多药理活性。近年来研
究认为沙苑子总黄酮可保护大鼠重要器官免受运动损伤，明显提
高大鼠的运动能力 ，抑制肝纤维化形成 ，抗肿瘤E4-6 3，此外
对SHR和RHR -8 3有明显的降压作用。但有关沙苑子的质量标
准中，由于缺少化学对照品，尚无沙苑子黄酮含量控制指标，2005
年版的《中国药典》中沙苑子的质量标准也仅有性状、显微、荧光
检测等内容。为了进一步研究和完善沙苑子的质量标准，迫切需
要研制一种或多种对照品。沙苑子苷A是沙苑子黄酮的主要特
征性成分，且在沙苑子中的含量较高，也是沙苑子保肝抗肝纤维
化的主要有效成分之一。本文从沙苑子中提取、分离和纯化沙苑
子苷A，制备沙苑子苷A对照品，为制定和完善沙苑子及其制剂
的质量标准提供沙苑子苷A对照品。
1 仪器与材料
美国Nicolet公司fVr—IR Magna一550红外光谱仪(KBr压
片)；美国VARIAN公司INVOA一400超导核磁共振谱仪核磁共
振仪；美国ABI Qtrap2000液相色谱一质谱仪；英国MICROMASS
GCT OA—TOF高分辨质谱仪；惠普7530一GUV／VIS紫外光谱
仪；岛津LC一20A高效液相色谱议，SPD—M20A二极管阵列检
测器，岛津1．22 SPI色谱工作站；WC一1，显微熔点测定仪。
沙苑子A complatus R．Br．苏州雷允上药业集团公司提供，产
地为陕西渭南，由苏州大学刘春宇教授鉴定为豆科植物扁茎黄芪
Astragalus complanatus R．Br．的种子；黄酮吸附树脂ZTC一5型(天
津正天澄清技术有限公司)；聚酰胺(100—200目，浙江省台州市
路桥四甲生化塑料厂)；聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化
塑料厂)；硅胶(青岛海洋化工厂)，其它化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 沙苑子苷A的制备工艺取沙苑子粗粉3 kg，用10倍量石油醚回流脱脂，脱脂药粉挥干，用10倍量的80％乙醇提取2次，
1．5 h／次，过滤，合并滤液，回收溶剂后，加水稀释至3 000 ml，通
过ZTC一5黄酮大孔吸附树脂，依次用水及50％ 乙醇洗脱，收集
50％乙醇洗脱部位，回收溶剂，干燥，即为沙苑子总黄酮(40 g)。
取总黄酮加水溶解，过滤，经聚酰胺柱层析，用水及不同浓度乙醇
梯度洗脱，收集水洗脱部位，上硅胶柱，用醋酸乙酯： 甲醇梯度洗
脱，醋酸乙酯：甲醇(10：2)洗脱部位析出沙苑子苷A结晶，甲
醇进行多次重结晶，得淡黄色针状结晶(700 mg)。
2．2 对照品的理化性质及结构鉴定结晶经显微熔点测定仪测
定，mp279～280℃(未校正)，盐酸一镁粉反应呈樱红色；酸水解
后溶液遇斐林试剂呈阳性反应，三氯化铝反应呈黄色；氧氯化锆
一枸缘酸反应鲜黄色消退，说明有5位羟基无3位游离羟基。提
示为黄酮苷类化合物。光谱分析结果如下：uV(am)MeoH：
266．2，333．8；IRMKBARx 3 371．8(",／OH)，1 655．0( C=0)，l 597．2，1
500。7(Ar)：l 253．8(Ar一0一C)，l 076．4，1 022(C一0)；EI—MS
nl／e：(苷元)300(M 一162+H)，271，l21；Mariner Mass(m／2)
625．18(M 624+1)；463．12(M 一162+H)；274．27；206．99说
明该化合物含两个六碳糖。”C—NMR：(见表1)。 H—NMR：12．
569(1H，S，5一OH)。8．169(2H，d，J=9 Hz，2 ，6 一H，7．16(2H，
d，J=9 Hz，3 ，5 一H)，6．80(1H，d，J：1 Hz，8一H)，6．41(1H，
d，J=1 Hz，6一H)，5．50(1H，d，J=7 Hz，glcl 一H)，5．39(1H，
d，J=7 Hz，glcl” 一H)，3．87(3H，S，7一OCH )。根据以上数据
分析，与文献[2]报道的沙苑子苷A一致。见表1及图1～3。
2．3 对照品的纯度检测
2．3．1 对照品的杂质检查
薄层色谱法检查：取适量沙苑子苷A对照品，50％ 乙醇制成
1 mg／ml的溶液，以醋酸乙酯：醋酸：水(10：2：2上层液)和
氯仿：甲醇：水(6．5：3．5：1)为展开剂，点样量5，10，2O l，在
硅胶G板上进行展开，以1％AIC1 乙醇溶液为显色剂，分别在
365 nm紫外灯和日光下观察。另于聚酰胺薄膜上，以丙酮：水
(1：2)进行展开，1％A1C1 乙醇溶液为显色剂，在365nm紫外灯
下观察。结果表明，在3种展开剂中对照品均为一个黄绿色斑
点，未见杂质斑点。比移值Rf分别为：0．3l，0．82，0．36。
高效液相色谱检测：色谱柱VP—ODS(150 illll×4．6 mill，5
m)；分别以乙腈：1％ 乙酸(22：78)，(16：84)，(14：86)为流
动相；流速：1 ml／min；柱温：40％ ；检测波长：266 nm，对照品溶液
质量浓度为0．1 mg,／ml，进样量20 l。结果表明，在3种流动相
下对照品均为一个主峰，保留时间分别为：7．45，l6．71，28．46
min。改变流动相分析时未出现异常峰。
2．3．2 面积归一化法纯度检查色谱柱VP—ODS(150 iflnl x4．6
mm，5 m)；分别以乙睛：1％ 乙酸(22：78)，(16：84)，(14：
86)为流动相：流速：1 mL／min；柱温：40℃ ；检测波长：266 nm，取
0．1 mg／ml的溶液进样量20 l。采集时间比保留时间延长I倍
以上，检测结果经峰面积归一化法计算，质量分数为99．2％ ，99．4％ ，99．0％ 。RP—HPLC色谱图见图4。
2．3．3 二极管阵列检测器(PDA)纯度检查在“2．3．1”项中色
谱条件下，200～800 nlll用PDA检测器记录色谱图，检查主成分
峰的纯度(见图5)。测定结果表明，主成分峰的纯度因子为
999．834；五点光谱图完全重合，表明主成分峰为单一物质峰。
3 讨论
实验中我们采用石油醚脱脂，80％乙醇提取，ZTC一5黄酮大
孔吸附树脂富集，提取的总黄酮得率高，杂项相对较少，选择聚酰
胺柱层析、硅胶柱层析、重结晶等方法分离纯化沙苑子苷A对照品，方法简便，纯度达98％ 以上，符合《新药审批办法》对中药对[4]
照品的规定，为制定和完善沙苑子及其制剂的质量标准提供了沙
苑子苷A对照品。
|
|
|
|
